Electro-TransformationofYeast

DavidAmberg

1. Growcellsto1X10E8orOD600of1.2-1.3.
2. Spincellsat5,000rpmfor5min,andwashpelletsinanequalvolumeoficecoldwater.
3. Washin1/2volumecoldwater.
4. Washin1/25volumeice-cold1M.sorbitol.
5. Treatcellswith25mM.DTTfor10minutesatroomtemperature.
6. Washcellswith1M.coldsorbitol.
7. ResUSPendcellsin1/200originalvolumecold1M.sorbitol.
8. Mix50µl.ofcellsuspensionwithnotmorethan5µl.DNA(inlowionicstrengthbuffer).
9. Immediatelytapcell/DNAsuspensiontothebottomofa0.2cmcuvette,pulseat1.5kV,200Æ,25µFaradays(pulsetimeÅ5millisec).
10. Immediatelyadd1ml.YEPD/1M.sorbitolandallowtorecoveratpermissivetemperatureforonehour.
11. Spindowncellsandresuspendin1ml.1M.sorbitol.
12. Plateonselectivemedia.

Notethat10ml.istheminimumculturevolumeandthatcellscanbestoredforafewdaysiftheyarenotDTTtreated.

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