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如何选择酶标仪的测定波长
mayitao
/发布时间:1629912604 /浏览量:175
目前用于酶联免疫吸附测定,最常使用的标记用酶是辣根过氧化物酶(HRP)，对应的底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD)。底物在过氧化氢溶液的存在下，经辣根过氧化物酶作用，分别氧化为2，2，—二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。
邻苯二胺(OPD)的氧化产物DAB,在pH值为5．0左右时，在450nm波长处有最大吸收，此时可用450nm的滤光片测定吸光值。当加入强酸作为终止试剂终止反应时，pH值降到接近0，此时最大吸收波长移至492nm，此时可用492nm的滤光片测定吸光值。
四甲基联苯胺(TMB)的氧化产物联苯醌，一般在波长为450nm处有最大消光系数。使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min，便于检测。
除了这两个基本滤光片外，考虑到双波长比色的需要，还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片，双波长比色主要用于消除非特异干扰的影响。
如果实验需要用酶标仪作微量生化测定，就需要扩展紫外检测功能，此时需要一个340nm波长滤光片。
总之，以上介绍的是常用的几个波长的滤光片，用户还可以根据自己的需求选择其他波长的滤光片。一般各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件，可以同时安装6～8片滤光片，可以满足用户的不同需求。
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