- 鸡抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)ELISA试剂盒发表的s...
- 过氧化物酶体增生物激活受体γ在大鼠出生前后心肌组织的表达规律...
- HRP标记的二抗可否用ECL化学发光显色法检测_问答详情_二...
- BACTH System Kit, EUK001/细菌双杂交...
- Dissociationofspleenandhemopoi...
- 美国外贸出口化学制品供应商数据信息579条信息数据云E优虚拟...
- Molecular cloning and characte...
- (四川)利尔化学股份有限公司2020届校园招聘 吉林大学 ...
- 杭州凯丰生物医药有限公司_工商信息_风险信息 天眼查
- 原料药中残留溶剂限度的确定方法
- Collection of Peritoneal Exuda...
- 酵母双杂交实验常见疑难解答 专区
- [08-18]clonetech公司 Gal4系统酵母双杂交与筛库.docx
- [10-02]酵母双杂交技术
- [08-09](完整版)酵母双杂交原理
- [10-02]transcriptional transactivation 的翻译结果cnki翻译助手
- [08-14]酵母双杂交系统介绍杂交文库构建钟鼎生物
- [08-10](完整版)酵母双杂交原理
- [10-02]蛋白质组中蛋白质鉴定技术的研究近况
- [08-08]CCK8的实验步骤、实验分组及检测方法
- [07-31]GAL4LUC双元表达系统和酵母双杂交系统有什么区别
相关回复
-
已帮助 0人
-
回复:时间:2017-10-03
注意事项(1)酵母双杂交照设定 规酵母双杂交操作般设定阳性照、阴性照及显色系统照三种照MATCHMAKER GAL4酵母双杂交筛选系统例: 阳性照:pGADT7-T + pGBKT7-53其T蛋白53蛋白已经明确酵母细胞内能够发结合并启报告基表达两种蛋白阴性照:pGADT7-T + pGBKT7-lam其已经明确T蛋白lam蛋白酵母细胞内能发结合 系统显色照pGADT7-Pcl1该表达质粒转入酵母细胞能引起-半乳糖苷酶-半乳糖苷酶泌检测显色系统否问题 (2)假阳性现象种原能造假阳性结见三种: 筛文库蛋白自身具转录性能够启报告基表达——种情况需要筛候选蛋白进行自激验证 酵母细胞内能同含止种文库蛋白其种文库蛋白与诱饵蛋白相互及结合种情况需要阳性克隆再划板2~3确保每酵母克隆含种文库蛋白诱饵蛋白;另外划板数宜否则现蛋白表达质粒丢失情况 其些明原造假阳性—种情况需要筛候选文库质粒表达诱饵蛋白质粒重新共转入酵母细胞或者通酵母杂交式重新验证必要pGADT7-cDNA质粒与pGBKT7-bait质粒载体调构建pGADT7-bait与pGBKT7-cDNA并重新酵母细胞验证真阳性结合调能酵母细胞做阳性结 (3)见问题及参考案 转化效率低—尽量使用新鲜培养基及新鲜、且直径2~3 mm左右酵母克隆确保酵母力;用于转化质粒使用前进行乙醇沉淀提高质粒纯度浓度 杂交效率偏低—能由于表达融合蛋白酵母细胞毒性某些情况液体培养基酵母换琼脂糖固体培养板比较种情况采用共转化进行试验;或者单转酵母克隆别铺5块10 mm培养板待克隆刮取所克隆于5 mL 0.5×YPDA重悬再按照规杂交操作步骤进行操作 背景高—使用HIS3作报告基由于HIS3基具定程度泄漏表达能现背景高情况使用适量HIS3蛋白竞争性抑制剂3-AT(3-amino-1,2,4-triazole)降低背景;或者再增加种更加严格报告基筛选Ade 诱饵蛋白具自激现象——采用克隆突变产自激段氨基酸序列敲除或突变种能破坏两蛋白间相互作用
- 1629223202clonetech公司 Gal4系统酵母双杂交与筛库.docx
- 1506932447酵母双杂交技术
- 1628445603(完整版)酵母双杂交原理
- 1506932447transcriptional transactivation 的翻译结果cnki翻译助手
- 1628877601酵母双杂交系统介绍杂交文库构建钟鼎生物
- 1628532002(完整版)酵母双杂交原理
- 1506932464蛋白质组中蛋白质鉴定技术的研究近况
- 1628359203CCK8的实验步骤、实验分组及检测方法
- 1627668002GAL4LUC双元表达系统和酵母双杂交系统有什么区别
- 1506867546酵母双杂交的一些问题
- 1506932464酵母双杂方法中,接合生殖和共转化哪个更好? 微生物 学术...
- 1506932468检测蛋白质与蛋白质之间相互作用的实验技术