一基因组酶切和电泳在200μl微量离心管中加入：25μlDNA样品(约10μg)，3μl限制性内切酶（MBI，10U/μl）5μl相应的10×buffer，补水到50μl。然后加一滴矿物油覆盖,稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后，取5μl酶切DNA样品于0.8%的琼脂糖凝胶上检测酶是否充分。如果酶切充分，灌制0.8%的agrose胶，加入上样buffer后，在25—30V稳压电泳12—16hrs。注意：在southern杂交中对，DNA的质量要求较高，否则酶切不完全导致失败。二转膜1用0.2MHCl脱嘌呤处理，偶尔轻轻振荡至溴酚蓝完全变成黄色，大约需要15~30分钟。然后用水漂洗凝胶2~3次，将水倒尽，加入碱变性液，偶尔轻轻振荡至溴酚蓝完全恢复到原来的蓝色（大约需要20~30分钟）。注意：此方法对酶切后目标片段大于15kb时用，如果小于15kb最好不要进行脱嘌呤处理，否则容易将片段打断，导致转膜后结合不紧密。2取一磁盘架上一洗净玻璃板，在磁盘中倒入适量的转膜缓冲液，在玻璃板上架两层长滤纸（30cm左右）（注意不要产生气泡）搭成盐桥。（滤纸比胶弱宽）依胶大小裁好尼龙膜，写好标记，正面向下，紧贴于胶上，防止有气泡产生，接这压两张同样大小的滤纸，不可过大以免短路，胶周围用X光片压条。胶应反面朝上因为DNA多在胶的底层。堆积吸水纸。上面放一小玻板，板上加一500g左右的重物。注意：防止短路3转膜16---20hrs后，将尼龙膜取下，胶染色，观察转膜效果。将膜用2xSSC浸泡20分钟，滤纸吸干后放在烘箱中烘2hrs（80℃）。待用。三杂交¨杂交炉与杂交管预热至65℃¨尼龙膜用2×SSC浸泡配置杂交液ssDNA沸水变性10min，冰浴10min，置冰浴备用ComponentsVolume(ml)NoteddH2O20.750×Denhardts0.6P/Hstock8.120%SDS(OR10%SDS)0.3(OR0.6)Total30mlfor2blots.65℃预热.AddpreparedssDNA（10mg/L）≥0.3ml倒入杂交液，加入尼龙膜，65℃预杂交4~5小时（新膜）注意：赶尽膜与膜之间的气泡后把几张膜同时放入杂交管，并用玻棒赶尽膜与管壁之间的气泡，最后加入杂交液，盖好管盖。四探针标记（for1~2blots）ddH2O7mlMarker1.5ml模板DNA2ml(about100ng)沸水变性8min，冰浴10min，瞬时离心AddBuffer+Primer7.5mlAdddNTPs(-dCTP)3mlAddKlenow(about1.5U)1ml(2U/ml)瞬时离心Add32p-dCTP1~2ml(10~20uCiperblot)37℃水浴≥4小时五杂交向标记探针的离心管中Add等体积TE25mlAdd10×体积变性剂（杂交液）250ml沸水变性10min，冰浴10min，将变性好的探针加入到杂交液中，混匀，65℃杂交过夜（12~16小时）。六洗膜1.2×SSC,0.5%SDS5min2.0.1×SSC,0.1%SDSxmin(RT)3.0.1×SSC,0.1%SDSχmin(65℃)(洗膜过程中不断检测放射性强度直至200~500)滤纸吸干洗液，保鲜膜包好，暗室中压片，根据放射性强度暴光若干天。冲洗X光片。说明：由于做southern的整个过程比较复杂涉及到的试剂也比较多，我这里仅做了个简要的叙述，但基本的实验过程已列举出来了，此过程中的试剂可以根据具体的实验要求适当调整，如果各位有那里不清楚或者那些部分需要具体的介绍，请与我联系，我们共同讨论学习，另外，做杂交的过程中一定要注意防止同位素泄漏，做好个人的防护工作。

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