2021-09-03基因表达载体的构建需要哪些工具酶

在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。　　基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。　　过程：　　首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同　　一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。

限制性核酸内切酶或限制酶——比作剪刀 DNA连接酶——比作针线（包括T4DNA连接酶 热稳定DNA连接酶等） 楼上的说的不对 这还有几种酶的比较 有兴趣就看看 希望采纳　　限制性核酸内切酶（以下简称限制酶）：限制酶主要存在于微生物（细菌、霉菌等）中.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并且能在特定的切点上切割DNA分子.是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶（“分子手术刀”）.发现于原核生物体内,现已分离出100多种,几乎所有的原核生物都含有这种酶.是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶.例如,从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列,并在G和A之间将这段序列切开.目前已经发现了200多种限制酶,它们的切点各不相同.苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因,就能被某种限制酶切割下来.在基因工程中起作用. 　　DNA连接酶：主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键,起连接作用,在基因工程中起作用. 　　DNA聚合酶：主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,在DNA复制中起做用. 　　DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上,形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键. 　　DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来.因此DNA连接酶不需要模板. DNA连接RNA聚合酶（又称RNA复制酶、RNA合成酶）的催化活性：RNA聚合酶以完整的双链DNA为模板,转录时DNA的双链结构部分解开,转录后DNA仍然保持双链的结构.真核生物RNA聚合酶：真核生物的转录机制要复杂得多,有三种细胞核内的RNA聚合酶：RNA聚合酶I转录rRNA,RNA聚合酶II转录mRNA,RNA聚合酶III转录tRNA和其它小分子RNA.在RNA复制和转录中起作用. 　　反转录酶：RNA指导的DNA聚合酶,具有三种酶活性,即RNA指导的DNA聚合酶,RNA酶,DNA指导的DNA聚合酶.在分子生物学技术中,作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作.在基因工程中起作用. 　　解旋酶：是一类解开氢键的酶,由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构.在细菌中类似的解旋酶很多,都具有ATP酶的活性.大部分的移动方向是5'→3',但也有3'→5'移到的情况,如n'蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3'→5'移动.在DNA复制中起做用. 　　DNA限制酶作用于磷酸二酯键 　　DNA连接酶作用于磷酸二酯键 　　DNA聚合酶作用于磷酸二酯键 　　DNA解旋酶作用于氢键展开