1.初筛
    选择来自21只新斯科舍省鸭收费猎犬（NSDTR）的血清用于蛋白芯片筛选，其中9只为有ANA^S的犬，3名为有ANA^H的犬和9名健康对照的。将具有不同ANA（抗核抗体）模式的IMRD（免疫介导的自身免疫疾病）患者分为两个亚组：斑点（ANA^S）和同源（ANA^H）。通过分析确定了7种自身抗原（ILF2，FAM134B，CCDC97，ETFB，PAIP2，CTDP1和NUBP1），其中ILF2是最有希望的候选自身抗原。

图1. 实验设计及初筛结果
（a） 实验设计流程图；（b）ILF2被鉴定为犬免疫介导的风湿性疾病（IMRD）中的潜在自身抗原。
 

2.验证
     在体外表达重组放射性标记的ILF2，并用患者和对照血清进行免疫沉淀。放射性配体结合试验（RLBA）证实了蛋白芯片筛选的结果。在扩展队列中，血清采集分别来自与141个ANA^S，54个疾病组（16个IMRD ANA^H、21个IMRD ANA^neg、17个SRMA）以及75个健康对照组，研究发现，ILF2自身抗体仅在ANA^S血清中发现。

图2.大样本验证ILF2
（a）放射性配体结合验证ILF2作为自身抗原；（b）扩展队列验证ILF2作为自身抗原（IMRD ANA^S，IMRD患者采用斑点抗核抗体（ANA）模式IMRD；ANA^H，IMRD患者采用同源ANA模式IMRD；ANA^neg，IMRD患者没有ANA；SRMA，类固醇反应性脑膜炎-动脉炎。）

3.ILF2和ILF3关联性研究
   ILF2蛋白主要在细胞核中表达为与ILF327的异二聚体复合物。由于这种关联，我们验证ILF3是否也可能是IMRD患者中自身抗体的靶标，与ILF2自身抗体一样，ILF3自身抗体仅存在于ANA^S血清中。
   ILF2和ILF3蛋白可与其他蛋白质形成复合物，包括RNA结合基序蛋白，X染色体-RBMX（也称为hnRNPG），而RBMX被认为是狼疮样疾病和ANA^S的自身抗原。为了更好地理解RBMX自身抗体与ILF2或ILF3之间的关系，对RBMX自身抗体的总犬群进行了筛选。在分析所有三种抗原的自身抗体的148个ANA^S样品中，95个（64.2％）对于至少一种抗原是阳性的，而对于ILF2和ILF3是77（52.0％），没有血清仅对ILF3呈阳性。

图3. 筛选ILF3和RBMX自身抗体的犬群
（a）使用放射配体结合测定法筛选狗中的ILF3和RBMX（b）自身抗体；（c）ILF2，ILF3和RBMX的反应性。

   后续研究还评估了ILF2和ILF3自身抗体在人类疾病中的存在，筛选了患有SLE，Sjögren综合征或系统性硬化症（硬皮病）患者的血清，发现ILF2和ILF3自身抗体的频率较低。研究表明ILF2和ILF3自身抗体有可能用作诊断犬的生物标志物，并且还可能用作人自身免疫疾病的筛查。

参考文献
BremerHD, etal.ILF2andILF3areautoantigensincaninesystemicautoimmunedisease[J].ScientificReports,2018,8(1).

关于我们
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   美国CDI的HuProt™人类全蛋白质组芯片是迄今为止最高通量的蛋白组芯片，包含20,240个蛋白，蛋白质库大，适用于大规模样本筛选而且消耗样本量较少。是用于疾病自身抗体标志物发现的理想工具。该款蛋白质芯片已应用于原发性胆汁性肝硬化、神经精神性红斑狼疮等自身免疫性疾病，以及胃癌等恶性肿瘤的生物标志物发现。
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