人白细胞抗原B27（HLAB27）核酸检测试剂盒相关交流-蚂蚁淘在线

人白细胞抗原B27（HLA-B27）核酸检测试剂盒

【名称】

通用名：人白细胞抗原B27（HLA-B27）核酸检测试剂盒

品牌：通派（上海）生物科技有限公司

英文名：HumanLeucocyteAntigenB27（HLA-B27）FluorescencequantitativePolymeraseChainReaction（PCR）Diagnostickit

汉语拼音：renleibaixibaokangyuanB27（HLA-B27）hesuanjianceshijihe

【目的】本试剂盒适用于检测人外周血等样本中白细胞抗原B27（HLA-B27）DNA，用于强直性脊柱炎、牛皮癣、溃疡性结肠炎、克隆氏病、Whipple病等疾病的辅助诊断。其检测结果仅供临床参考。

人白细胞抗原B27（HLA-B27）核酸检测试剂盒【原理】本试剂盒用一对HLA-B27特异性引物，经过碱裂解法提取DNA，后者在耐热DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以SD-Buffer（内含Mg2+、Tris-HCl等）、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-序列特异性引物SSP（SequenceSpecificPrimer）技术进行体外扩增，产物直接经2%琼脂糖凝胶，溴化乙锭（EB）染色，紫外灯观察，从而达到快速检测HLA-B27抗原之目的。

【组成】

名称	数量	规格
核酸提取液B	4管	500μl/管
HLA-B27PCR反应管	40管	50μl/管
HLA-B27阳性质控品	1管	50μl/管
阴性质控品	1管	500μl/管

备注：10×RCLB等另行配备。

【标本采集、保存和运输】

1.适用标本类型：全血。

2.标本采集：

全血：用无菌注射器抽取受检者静脉血2-3毫升，注入无菌5ml枸橼酸钠或Na2EDTA的抗凝管中，反复颠倒3-5次以充分混匀，立即送检。

3．保存和运输：上述处理后的标本可保存于-20℃，保存期为6个月，-70℃可长期保存。运送应采用0℃。

【适用仪器】主要包括ABIGeneAmpPCRSystem9600、ABIGeneAmpPCRSystem9700等，或取得资格认证的定性PCR仪。

【贮藏及规格、有效期】-20℃避光保存，避免反复冻融。40份/盒。有效期12个月。

1．DNA提取

1.1外周血淋巴细胞分离（用户亦可用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞）

1.1.1将抗凝血摇匀，取500μl转至一洁净的1.5ml离心管中，编号标记。

1.1.2加入1ml1×红细胞裂解液（RCLB,试剂盒配备10×RCLB，使用前请用双蒸馏水按1：9比例配制成1×RCLB），剧烈震荡30s，3,000g离心5min，弃上清。

1.1.3重复1.2两至三次至无明显红色沉淀。（若沉淀明显，请再重复步骤1.2一次）。

1.1.4加入1ml生理盐水，剧烈震荡15s，10000g离心5min，弃上清。

1.1.5沉淀加50μl核酸提取液B（使用前请室温溶解并充分混匀）,100℃恒温10min，13,000g离心3min，取上清4μl进行PCR反应。

1.2阴性质控品：取50μl阴性质控品，加50μl核酸提取液B充分混匀（提取液用前需室温溶解并充分混匀）后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl做PCR反应。

HLA-B27阳性质控品：直接取3μl进行PCR扩增。

3．PCR扩增

根据标本量取HLA-B27PCR反应管，加入处理后样品3μl，1,0000rpm瞬时离心30秒。将各反应管放入PCR仪器的反应槽内，按对应顺序标记阴性质控品，HLA-B27阳性质控品、阴性质控品以及未知标本，循环条件如下：

94℃变性2min，93℃30s→58℃30s→72℃30s，共35个循环。

3．电泳检测

3.12%琼脂糖凝胶配制：稀释50×TAE（或5×TBE）至1×TAE（取20ml50×TAE，加980ml双蒸水至1L），称4g琼脂糖放于500mL锥形瓶中，1×TAE200ml,置入微波炉中加热熔解（避免加热沸腾溶液外溢），再加入20μl溴化乙锭（EB）充分混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后使用。

3.2电泳检测：直接取PCR扩增产物15μl，用加样枪点样于琼脂糖凝胶孔中，以5V/cm电压，1×TAE中电泳，紫外灯下观察结果。

4．结果判断：阴性质控品无带出现（引物带除外），HLA-B27阳性质控品出现144bp扩增带，若被检样品出现144bp扩增带为HLA-B27阳性；否则为HLA-B27阴性。

【质控标准】

阴性质控品：阴性质控品应为阴性；无条带（引物带除外）。

HLA-B27阳性质控品：于144bp处出现目的条带。

否则，此次试验视为无效。所有实验应重新进行。

【注意事项】

使用前请仔细阅读说明书。并且严格按照说明书进行操作。

试剂盒内各种组分使用前应充分融化混匀并经高速短暂离心后试用。每盒试剂请于3次内使用完毕。

试剂盒须避光保存，以免荧光物质衰减。所有使用的离心管、Tip头应高压灭菌，而且必须不含DNase。

PCR操作应严格按照要求分区（试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等），防止实验室污染。

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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