2016-05-21细胞复苏、铺板都不贴壁 皿里养着传代的状态很好

做细胞实验快半年了，一直都还挺顺的，这次五一放完假回来，复苏一支HK2，操作都跟以前一样，没想到出了好多问题：

冻存液：90%血清（进口Gibco）+10%DMSO

冻存方法：包裹棉花直接-80℃过夜，第二天转移到液氮

冻存时间：1个半月前冻存的细胞，密度保证没问题，冻存前状态也好

复苏方法：液氮取出后37℃水浴，约2分钟溶解，加入6倍体积的完全培养基，800转离心5分钟，弃去上清，1ml完全培养基重悬，转移入培养皿（进口一次性塑料培养大皿），补足完全培养基，培养箱培养

第二天看细胞全都没贴壁，但是也没死，聚集成团装飘着，没有污染。不想重新离心加重机械损伤，就一直试试看的心态放在培养箱里养着了。又重新复苏一支，还是一样的结果，全飘着没贴壁。不死心，就往前面复苏的那一皿里直接加了1ml的血清，相当于18%的血清比例，过了一天去看，这下细胞都贴壁了。没有另外添加血清的那一皿就还是没贴壁。

另外还有一支以前复苏的HK2，也是一样的方法复苏的，那次复苏很好，细胞基本没什么死的，也都贴壁了，养在皿里状态也不错，但是拿来铺板就还是不贴壁，同样的培基（10%血清），铺板就一个不贴，皿里就都可以贴上。

求助各位战友：

1、复苏不贴壁是为什么？

2、增加血清比例能使复苏的细胞贴壁，这样的细胞是不是可以认为状态并不好，以后的培养是不是要一直这么高比例的血清？还是可以培养一段时间逐步减少血清比例？

3、仍然是10%血清，为什么铺板就不贴壁，而皿里的就没事？是不是铺板的时候也要增加血清比例呢？那在板里干预的过程中是不是要一直保持高比例的血清培养？

4、我的冻存及复苏方法是否有错？我觉得我的HK2从形态、生长速度上来说状态应该是不错的，而且我已经更换了全新的培基、血清和双抗，重新配置了完全培养基，不知道为什么会出现这种不贴壁的问题

拜托各位集思广益，细胞实验已经为了这个不贴壁的问题停滞快2周，心急如焚啊，拜托各位！