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固相pH梯度等电聚焦实验一等电聚焦
试剂、试剂盒 | 丙烯酰胺单体贮液过硫酸铵贮液
实验步骤 | 打开循环水浴,设置冷却温度,一般为10℃。 将制好的固相pH梯度凝胶铺在冷却板上,注意正负极。其间涂以液体石蜡或煤油,避免气泡陷入,以保证胶板和冷却板之间的良好接触。 用合适的电极溶液(参见表7.7)润湿滤纸电极条,分别放置凝胶的酸、碱侧。有的仪器采用粗电极与凝胶直接接触,不需加电极条。 按冷却板上的格子和预先设计的实验计划将样品加在凝胶上。微量样品可直接滴加,稀样品加在滤纸块上或小槽中。固相pH梯度等电聚焦与载体两性电解质等电聚焦的样品处理方法相似,只是前者pH梯度已在凝胶中固定,所以样品中的盐对梯度影响不大,但过高的盐浓度也会造成凝胶电导的降低而烧胶或使谱带畸变。 将白金电极丝分别放在滤纸电极条的中心,再将阳极和阴极分别与电源的正、负极相连。接通电源,电参数参见表7.8。
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