实验技术简介：
Brdu，即5-Bromo-2"-Deoxyuridine,中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。但由于抗体分子量大，难于掺入并被有效检测，因此BrdU检测需采用DNA酶或HCl或加热使DNA变性；这些处理方法会破坏抗原识别位点，此外许多细胞周期分析的染料都需要dsDNA，这种处理方法也使得同一样本无法同时进行细胞周期分析。对于植物细胞等有细胞壁的分析，采用抗体检测还需要消化细胞壁，细胞壁消化酶常含有一些杂质，会导致检测的可靠性降低，同时BrdU检测则需要进行长时间的孵育--几个小时甚至过夜。

实验操作流程：
1、细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4、甲醇/醋酸固定10min。
5、经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6、5％正常兔血清封闭。
7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

实验注意事项：
客户提供：
1、提供新鲜的肝素或者EDTA抗凝的外周血；
2、提供新鲜的培养细胞，提供新鲜组织，需要实验室制备成单细胞悬液。
交付标准：
完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）