BrdU标记法

1．细胞以1.5×10⁵/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G₀期。

2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。

3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。

4．甲醇/醋酸固定10min。

5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H₂O₂-甲醇30min灭活内源性氧化酶。

6．5％正常兔血清封闭。

7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。

8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。

9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。