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              细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
产品简介：
Leagene细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一种采用经典的碘化丙啶染色(PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征，根据光散射的特点，PI染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。细胞凋亡时，出现凋亡细胞皱缩、染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的前向光散射低于正常。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。
Leagene Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测，亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。
 
产品组成：

编号 名称	RYY14633 50T	Storage
试剂(A): PI Stain Buffer	25ml	-20℃
试剂(B): PI Stain(20×)	1.5ml	-20℃ 避光
试剂(C): RNase A Solution(50×)	0.5ml	-20℃
使用说明书	1份

 
 操作步骤(仅供参考)：
1、细胞样品的制备：
⑴贴壁细胞：
① 收集上述细胞悬液到离心管内。
② 4℃，1000g离心，使细胞沉到管底。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④ 4℃，1000g 离心，使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
⑵悬浮细胞：
① 4℃，1000g离心，使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。
④ 4℃，1000g 离心。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
2、细胞的固定：加入1ml冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h或更长时间。4℃固定12～24h可能效果更佳。
3、细胞的清洗：
① 4℃，1000g 离心。
② 小心吸取上清并丢弃。
③ 加入约1ml提前预冷的PBS，重悬细胞。
④ 4℃，1000g 离心。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。
4、 PI染色：
⑴ 一步法：
①
 PI染色工作液的配制：根据待检样品的数量，取适量试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)混合形成PI染色工作液。配制好的PI染色工作液4℃避光保存待用，24h有效。
②
 在每个待检细胞样品中， 加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀， 置于37℃避光水浴30min。
⑵ 两步法：
①
 在沉淀细胞中加入40μl PBS和10μl RNase A Solution(50×)，置于37℃水浴30min。
②
 PI染色工作液的配制：根据待检样品的数量，取适量试剂(A)、试剂(B)混合形成PI染色工作液。配制好的PI染色工作液4℃避光保存待用，24h有效。
③
 在每个待检细胞样品中， 加入500μl配制好的PI染色工作液，轻轻重悬细胞沉淀， 置于4℃避光30min。
5、检测与分析：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
 
染色结果：凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型，在光散射谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。
 
 
有效期： 12个月有效。亦可4℃保存, 1个月有效。