Materials

2xHEPES:8gNaCl,0.105gNaHPO4,6.5gHEPES,H2Oto500mL,pH6.95to7.10(tryarange)

2MCaCl2:storeinaliquotsat-20°C

DNA4mg/mL

Procedure

(Thevolumescanbescaledupasnecessary)

1)Letallsolutionsequilibratetoroomtemperature.

2)Feedcellsona10cmdishwith7mLfreshmedia.Theyshouldnotbemorethan50%confluent.

3)Add0.5mLof2xHEPEStoaconicaltube.

4)Toaseparatetubeadd61µLof2MCaCl2,plus4-10µg(1-2.5µL)DNA,andq.s.to0.5mLbyadding(438µL)H2O(ortryTEpH8.0).Mixwithapipetandtransferdropwisetothe2xHEPESsolution.Mixandthenimmediatelysprinkleontopoftheculturedcells.Swirlgentlyandreturntotheincubatorovernight.

5)Changethemediathefollowingday.

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