原代细胞培养服务介绍

实验原理：
细胞培养是采用无菌操作的方法，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，从而观察细胞的增殖、分化以及细胞衰老等过程的生命现象。常见的细胞培养方式可分为贴壁和悬浮两种。细胞培养的常规操作包括：1）细胞的接种和传代；2）细胞计数；3）细胞的复苏和冻存。嘉美实验拥有高端的细胞实验设备,能为广大实验者们提供优质的细胞源及检测服务！

技术应用：
细胞培养至最佳状态后可进行各种处理，如1）加药处理；2）质粒转染；3）病毒感染；4）培养条件的改变等，进而对细胞功能进行各项检测，并对细胞信号通路蛋白进行表达分析及功能研究。
 

神经元细胞培养实验介绍

实验技术简介：
体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学和生物因子（如神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。

实验操作流程：
1、取材。脑则取出相应组织，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓则固定于琼脂板上，用小刀将其要成背腹两侧，分别培养。
2、细胞分离与接种。神经组织用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接种液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用细口吸管吹打细胞悬液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上层细胞悬液，计数，预置细胞密度，接种于培养皿（1×106），做电生理应为5×105或更低。
3、抑制胶质细胞生长。培养3-5d后，也有人认为培养7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神经胶质细胞的生长。
4、观察。接种6-12h，开始贴壁，并有集合现象，细胞生长突起明显，5-7d胶质细胞增生明显，7-10d胶质细胞成片于神经细胞下面，形成地毯，2周时神经细胞生长最丰满，四周晕光明显，一个月后，有些神经细胞开始退化，变形，甚至出现空泡，一般培养2-4周最宜。

实验注意事项：
客户提供：
细胞建模的药品或试剂，细胞（可代购）

交付标准：
1、细胞
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）

其他：
1、神经细胞只能增大，而不能增殖，只能原代，不能传代。
2、不会有细胞周期，而且随培养时间的延长，细胞数量在下降，但胶质细胞可以，神经胶质细胞也可以。
3、在培养过程中，早期9-12d时，有较多的神经细胞死亡，这是第一次死亡阶段，应注意保持条件的恒定。在此之后存活下去的细胞一般突起长而多，且相互形成突触。

 

胃上皮细胞培养技术介绍

实验技术简介：
上皮细胞是位于皮肤或腔道表层的细胞。上皮细胞根据器官的不同而有所指不同：尿常规的上皮细胞，是衰亡、脱落的皮细胞，没有很特定的指向意义。非SLE的人，包括正常人，有了什么相关的炎症，脱落下去，给尿常规检到了，也是有的。

实验操作流程：
1、取材：取胃溃疡或胃癌手术切除胃标本远端非病变区粘膜少许。
2、清洗：用含庆大霉素（400微克/毫升）和二性霉素（2微克/毫升的Hanks）液漂洗后，用钝器剥离下粘膜，剪成1mm3大小。
3、消化：在I型胶原酶和透明质酸酶中，于37℃中消化80分钟。
4、离心：收集细胞悬液，800转/分离心后，Hanks液漂洗两次。
5、接种：末次离心后加入含有1%～2%胎牛血清的完全培养基，接种入不同孔数的培养板中，接种量依不同实验目的而定。

实验注意事项：
客户提供：
细胞建模的药品或试剂，细胞（可代购）

交付标准：
1、细胞
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）

其他：
血清中含有血小板来源的生长因子（PDGF），易促成纤维细胞的生长；如用好的、不含PDGF的无血清培养基培养可能更好。

滑膜细胞原代培养技术介绍

实验技术原理：
将人滑膜从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置α-MEM生长培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。

实验操作流程：
1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中(静止)，在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。
2、在超净台中将标本放入培养皿中，加入α-MEM洗涤。
3、获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织，附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化)，仔细剔除脂肪组织，用α-MEM洗二次(以去除红细胞)，放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎。
4、用双倍获得组织的体积含有4mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化37℃孵育120分钟(在此期间震动混匀数次)。
5、30分钟后收集第一管细胞：细胞悬液经70μm细胞滤网过滤，用1500-2000转离心6分钟，上清为Ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织，继续用于消化。
6、离心管底细胞用α-MEM离心洗涤2次，每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转，离心6分钟，最后一次用记数板观察到有细胞。细胞最终悬浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中，接种到培养瓶中培养。
7、60钟后收集第二管细胞：细胞悬液经70μm细胞滤网过滤，用1500-2000rpm离心6分钟；用α-MEM洗2次，每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000rpm离心6分钟，最后一次用记数板观察细胞并计数。细胞最终悬浮于α-MEM含有10%胎牛血清中，接种到培养瓶中培养。
8、必要时可做第三管细胞收集；并立即作原代滑膜细胞培养。
9、每2-3天换液一次。

实验注意事项：
客户提供：
细胞建模的药品或试剂，细胞（可代购）

交付标准：
1、细胞
2、完整项目报告（材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果）

其他：
1、全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM，加10%胎牛血清。不能用小牛血清，胎牛血清用国产即可；
2、必须用Ca2+-free的PBS。

 

原代肝细胞定制介绍

 
技术简介：
肝是生物转化和蛋白质合成的主要器官，也是药物毒性作用发挥的主要场所。因此许多的体外测试都选用肝细胞来研究药物间的相互作用和其他一些生化过程。
嘉美实验用于培养原代细胞的组织采集于各大医院（包括协和医院、301医院、北三医院等），采集根据美国IRB和HIPAA批准的方案进行。这些原代细胞均来自新鲜组织，并采用公司专利的技术来优化目的细胞生长条件，降低杂细胞（如脂肪细胞、纤维细胞等）的污染。分离的细胞经过短暂培养、传代，然后迅速冻存。这些保持分化状态的细胞可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。
嘉美实验原代肝细胞产品均经过严格的QA/QC检测，可以直接用于药物优化和筛选、基因克隆、表达图谱分析以及各种分子生物学和药物学实验的研究。凭借着先进的技术设备和资深的专业经验，嘉美生物能为您提供高品质的原代细胞产品和特殊的定制服务：

1、各种新鲜原代肝细胞
嘉美实验除提供多种人、小鼠、大鼠、猴等新鲜肝细胞产品外，嘉美生物还可以为您提供特定动物、特定组织、特定年龄的新鲜肝细胞定制服务。

2、各种原代细胞提取物
嘉美实验除提供的人、小鼠、大鼠、猴等四大类的肝微粒体、肝S9、CYP450酶和其他亚细胞提取物外，嘉美生物还可以为您提供专业的原代细胞提取物定制服务。
嘉美实验可以同时提供高质量的原代细胞产品和专业的个性化定制服务，为您的研究提供最新鲜优质的实验材料，提供其他原代细胞相关专业服务（原代肝细胞靶药分析服务、原代细胞靶药优化服务和原代细胞药物筛选等）。嘉美生物能完美整合各类原代细胞类服务，是原代细胞分离，原代细胞提供，原代细胞实验课题服务中的佼佼者。
 目前，嘉美实验可以提供180多种来自小鼠、大鼠、狗、猴和人（正常和病变）原代肝细胞，同时嘉美生物可以根据您的需求，为您提供专业的原代肝细胞定制服务。嘉美生物提供的原代肝细胞定制服务具有以下优势：
1)、定制服务周期短：正常情况下，一般需要4-6周。
2)、肝细胞种类广：一般为小鼠、大鼠、狗、猴、人等，还可以根据您的具体需求提供特定动物的肝细胞。
3)、严格的质量检测：嘉美生物提供的原代细胞均经过严格的质量检测和分析，并配备详细的分析证书和临床信息诊断。
4)、完善的售后服务：嘉美生物不仅提供给您优质的产品，同时还可以为您提供专业的技术支持，确保您正确使用原代细胞。