敲除细胞株构建/敲除株构建

技术原理：

ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats（CRISPR）/Cas9是细菌和古细菌在长期进化而形成的一种适应性免疫防御机制，CRISPR/Cas9系统可以用于各种基因组的编辑。

CRISPR/Cas9系统会通过小导向RNA(sgRNA)对切割区域进行识别，并利用Cas9内切酶实现在识别位点中间预测的位置切割，造成DNA双链断裂，在细胞进行易错修复后造成随机的突变。CRISPR/Cas9系统其突变效率高、灵活简单，周期短，成本低，已经被广泛的应用于基因编辑的研究。CRISPR/Cas9系统应用最多的领域是基因敲除株系构建和基因敲除动物的研究。

目前可提供项目服务包括：CRISPR/Cas9实验方案设计、CRISPR/Cas9基因敲除载体构建、CRISPR/Cas9基因敲除载体病毒包装、CRISPR/Cas9基因敲除细胞株构建。

服务特点：

1、定制特定基因敲除细胞系只需提供基因名称；

2、快速获得有效sgRNA，基因编辑效率高；

3、实验周期短；

4、可根据需要提供CRISPR/Cas9慢病毒包装服务。

操作流程：

1、靶向目的序列sgRNA的设计、载体构建及活性验证；

2、目的细胞系共转染，初步筛选混合克隆；

3、铺单克隆，单克隆筛选及鉴定细胞基因型；

4、阳性细胞株的扩增。

其他相关技术：

稳转细胞株筛选  敲除细胞株构建  靶基因验证  启动子活性验证  Pulldown  有效靶点筛选  

细胞凋亡检测  细胞增殖检测  细胞周期检测  细胞侵袭实验  细胞迁移/细胞划痕实验