1、蛋白质的处理：胶体金标记蛋白的制备 胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。 （1）待标记蛋白溶液的制备 将待标记蛋白预先对0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后 100 000g4℃离心1h，去除聚合物。 （2）待标胶体金溶液的准备 以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl调胶体金液的pH值。标记IgG时，调至9.0；标记 McAb时，调至8.2；标记亲和层析抗体时，调至7.6；标记SPA时，调至5.9～6.2；标记ConA时，调至8.0；标记亲和素时，调至 9～10. 由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板，因此，在调节p......阅读全文 盘点：31项与免疫学有关的分子生物学实验技术现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解，并且导致了免疫新策略的产生，免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。 一、GST pull-down实验 GST是指谷胱甘肽巯基转移酶，GST pull-down实验是一个行之有效的验 小动物活体成像技术 1、背景和原理1999年，美国哈佛大学Weissleder等人提出了分子影像学（molecular imaging）的概念——应用影像学方法，对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究。传统成像大多依赖于肉眼可见的身体、生理和代谢过程在疾病状态下的变化，而不是了解疾病的特异性分子事件。 连缀转录分析实验 核连缀分析用于确定某个克隆的基因是否受转录调控。理论上，核连缀分析应该在检测稳定状态 mRNA 水平变化的杂交实验之后，而在启动子分析之前进行。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理离心机和转头，沸腾的水浴锅， Dounce 匀浆器， GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒产品说明书GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 YIJI GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂是一种旨在使用同位素（[γ32P]ATP）和cAMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase K），标记纯化的目标融合蛋白 实时荧光定量PCR Real Time PCR实时荧光定量PCR 其定量的基本原理是在PCR 反应体系中加入非特异性的荧光染料（如：SYBR GREEN I ）或特异性的荧光探针（如：Taqman 探针），实时检测荧光量的变化，获得不同样品达到一定的荧光信号（阈值）时所 用比较基因组杂交描述染色体结构异常实验 实验方法原理比较基因组杂交（CGH)是一种能够在一步全基因组筛查程序，描述G带不能发现的细胞遗传物质增加或减少的分子细胞遗传学技术。CGH优于进行全染色体涂染（wcp)的常规荧光原位杂交（FISH)和多色FISH之处，是它不仅能够识别增加的未知片段的染色体来源，而且还可将该片段定位于特定的染色体区带 胶体金标记蛋白A技术 胶体金标记蛋白A技术（Protein A-gold technique, PAg法） PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A 非编码序列-内含子子长度多度性((ILPs) 实验概要本实验中运用Perl脚本用于比较Nipponbare和93-11基因组序列，从而开发潜在的ILP标记，通过EPIC-PCR开发候选ILP标记，最后用实验验证及评价了ILP标记。实验步骤1. 水稻釉粳亚种基因组比较搜索ILP我们运用Perl脚本用于比较Nipponbare和93-11基因组序列 用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测 实验概要间接法是用未标记的一抗和标记有辣根过氧化物酶(HRP)的二级试剂，经过简单孵育后，进行酶促反应。将抗体直接加入细胞中就可以使一抗与细胞上的抗原结合，在加入不同抗体或同一抗体不同稀释度的溶液时，注意不要发生交叉污染，每一张盖玻片或样品管只能用于某一抗体溶液。抗体能够与相应抗原发生特异性结合，而 TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明 TUNEL(TdTmediateddUTPNickEndLabeling)是检测细胞凋亡的经典方法。本试剂盒采用TUNEL法，应用高活性的基因重组末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TerminalDeoxynucleotid 用辣根过氧化物酶标记的试剂进行间接检测 实验概要间接法是用未标记的一抗和标记有辣根过氧化物酶(HRP)的二级试剂，经过简单孵育后，进行酶促反应。将抗体直接加入细胞中就可以使一抗与细胞上的抗原结合，在加入不同抗体或同一抗体不同稀释度的溶液时，注意不要发生交叉污染，每一张盖玻片或样品管只能用于某一抗体溶液。抗体能够与相应抗原发生特异性结合，而 GST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂盒使用说明 主要用途YIJIGST融合蛋白同位素（[γ32P]ATP）激酶标记试剂是一种旨在使用同位素（[γ32P]ATP）和cAMP依赖性蛋白激酶A（protein kinase K），标记纯化的目标融合蛋白，成为敏感探针的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各 重视临床检验标本采集和处理临床检验标本采集和处理问题已普遍引起了人们的重视。为做到临床检验质量保证，中华人民共和国卫生部卫生技术标准化委员会已将临床检验标本采集和处理的有关问题，列为国家和行业的标准化文件，以达到对临床检验工作的规范化要求。如中华人民共和国卫生行业标准WS/T225-2002﹑WS/T226-2 蛋白质组学几种定量方法的案例解读上期分享的蛋白组学内容，是不是有些小伙伴还绕在云里雾里呀？这次，小编用实例说话，帮您梳理清楚。 一、Label-free定量 Label-free定量，顾名思义就是不需要对比较样本做特定标记处理，只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化 cRNA探针在原位杂交组织化学 Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的，不像双链的DNA探针，在溶液中不会再退火（reanneal），因此，较大百分比的探针可参与杂交反应，较cDNA探针 实时无标记细胞分析技术（RTCA）常见问题解析（一） 身在实验室中的您，RTCA 实验做了很多，操作越来越娴熟，实验曲线也越来越漂亮，当沉浸在实验成功的喜悦中时，是不是也有对 RTCA 技术的些许疑惑和问题？不用担心，下面昊诺斯就马上为您奉上丰盛的 RTCA 技术 FAQ 套餐，将您心中的问题一网打尽！技术原理篇Q: 什么事实时无标记细胞功 利用ProteOn XPR36分析蛋白与小分子相互作用（二） Anti-DNP抗体和DNP标记氨基酸的相互作用分析：如果作为ligand的蛋白分子非常大（超过100kD），那么这些分子在标记的时候用于空间位阻的关系，会占据基质的多个结合位点，导致标记效率下降。为此，很多人用ligand和analyte分子量之比来衡量芯片或仪器的灵敏度。GLH芯片可以达到400 定 量 PCR 技 术 简 介 聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）是微量核酸扩增的有效工具，由于其灵敏、特异、快速等优点，在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展，特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面，不仅需要检测其存在是否 物理所发现一把测量玻璃结构的\"尺子”对于非晶态固体，也就是玻璃的结构，长期以来教科书的观点是玻璃的原子排布和液体没有明显区别，空间结构上都是无序的，以至于有\"玻璃就是冻结的液体”这种说法。然而，这种观点在热力学上是明显站不住脚的，因为完全随机的排布所带来的巨大结构简并度难以支持玻璃以固体形态存在，能量相近的不同随机结构间将很容易相 用 T7 噬菌体 DNA 聚合酶进行双脱氧测序反应实验 本方案参照了 Tabor 和 Richardson(1987a,1989b,1990) 的方法，采用单链 DNA 模板进行 DNA 测序（有关单链 M13 噬菌体和质粒 DNA 制备，请参见第 3 章的方案 4、8 和第 12 章的方案 1)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕 免疫电镜技术 近年来，免疫学方法与电镜技术相结合，形成了一种免疫电镜技术(Immunoelec-tronmicroscopy，IEM)，使抗原定位达到了亚细胞水平。该技术由以下环节组成：(一) 组织准备 用于免疫电镜检测的组织多种多样，所以各自在组织制备时都具有其特点。一般讲，组织力新鲜并进行无活动力状态处理，例 CRISPR：基因编辑刚初出茅庐每当有新的CIRSPR-Cas9相关文章发表时，Addgene公司的工作人员就会迫不及待地研读。Addgene是家非盈利公司，研究者们把自己使用的分子工具存放在这里，以供其他科学家们尽快使用这一技术。Addgene公司执行董事Joanne Kamens 指出，一篇大热的论文一发表，几分钟内他们就 免疫荧光技术(immunofluorescence technique)-3 思考题 1. 酶联免疫吸附实验的基本原理是什么？常用方法有那些？ 2. 间接法和直接法相比各有什么优缺点？ 放射免疫测定法—— 125 I 标记技术 放射免疫测定 (radioimmunoassay, RIA) 是将同位分析的高灵敏度与抗原抗体 Nature：CRISPR浪潮席卷学界每当有新的CIRSPR-Cas9相关文章发表时，Addgene公司的工作人员就会迫不及待地研读。Addgene是家非盈利公司，研究者们把自己使用的分子工具存放在这里，以供其他科学家们尽快使用这一技术。Addgene公司执行董事Joanne Kamens 指出，一篇大热的论文一发表，几分钟内他们就 通过cDNA宏阵列和基因表达谱检测环境毒物毒理效应实验 本章主要介绍如何通过制备和使用 cDNA 宏阵列来检测环境毒物对基因表达的影响，同时具体介绍实验所用到的材料与方法。由于一些非传统模式的物种研究购买不到商业化的芯片，应用本章讲述的方法，研究人员可以自行设计和使用适合自己实验目的的芯片。我们有意略去了实验中统计分析方面的内容，因为统计分析的方法仍有待 【盘点】定量蛋白组学将在未来10年飞速发展人类基因组计划的成功实施，我们已初步掌握了自身的遗传信息。但阐明人类基因组整体功能的功能基因组学仍任重而道远。蛋白质作为生命活动的\"执行者\"，自然成为生命科学研究的新\"宠儿\"。几乎在所有生命科学领域内，科学研究工作者都需要对细胞、组织或完整生物体的蛋白进行定性描述或定量检测。对一种细胞、组织或完 分子杂交技术（四） 六、核酸分子杂交实验因素的优化 （一）探针的选择 根据不同的杂交实验要求，应选择不同的核酸探针。在大多数情况下，可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下，必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如，在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸探针，在检测单链靶序列时应 分子杂交技术（四） 六、核酸分子杂交实验因素的优化 （一）探针的选择 根据不同的杂交实验要求，应选择不同的核酸探针。在大多数情况下，可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下，必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如，在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸探针，在检测单链靶序列时应

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