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제품특징
□ 특징
● 높은 signal-to-noise 비율
● 넓은 dynamic range
● 용이한 monitoring과 형광 정보 판독
전통적인 promoter reporter 분석법은 일반적으로 대부분의 promoter가 엄격하게 조절되지 않기 때문에 분석의 어려움이 있다. 이로 인하여 발생되는 background는 실제 promoter induction 후 noise에 비하여 상대적으로 낮은 signal을 유도 한다. 이러한 leaky-promoter의 문제점을 해결하기 위한 이전의 접근 방법은 reporter를 매우 빠르게 항시적으로 분해되도록 변형하는 것이었다. 그러나 이 방법은 높은 background 문제점에 대한 접근법으로 promoter가 활성화되어 있는 세포에서도 많은 양의 reporter molecule을 축적할 수없는 한계가 있다. 결과적으로 이런 형태의 분석은 낮은 signal을 나타낼수 밖에 없다.On-Demand Fluorescent Protein Reporter Systems은 이러한 문제점을 해결하기 위해 여러 가지 기술을 조합하여 사용하고 있다. 각 system은 bright fluorescent protein repoter (AmCyan1, tdTomato, ZsGreen1)를 이용하여 signal 강도를 높이는 동시에 ligand-dependent ProteoTuner protein stabilization/destabilization 기술로 background를 제거하고 있다 (1). Signal을 측정하고자 할 때는 세포막을 통과할 수 있는 ligand인 Shield 1을 첨가하여 reporter를 안정시키면 된다.On-Demand Fluorescent Reporter System은 일반적인 plasmid vector를 이용하는 제품과 lentiviral vector를 이용하는 제품이 있다. Lentiviral System에는 vector에 맞게 진보된 4세대 Lenti-X HT Packaging System이 포함되어 있다 (2).Clontech의 ProteoTuner protein stabilization/destabilization 기술에 관한 자세한 내용은 www. clontech.com/ptuner를 참조하여 주십시오.
Figure 1. DD-Fluorescent Protein promoter reporters provide a much greater fold increase in signal intensity than traditional fluorescent protein reporters, which do not contain the DD. HEK 293 cells were transfected with plasmids encoding the following reporters: CRE-tdTomato, CRE-DDtdTomato, CRE-ZsGreen1, and CRE-DD-ZsGreen1. 24 hr later, the cells were stimulated with 10 μM forskolin and simultaneously treated with 1 μM Shield1. After 4.5 hr, fluorescence intensity was measured via flow cytometry, and fold induction was calculated. The tdTomato and ZsGreen1 reporters containing the DD had three- and six-fold greater fluorescence intensity respectively, than the versions without the DD, due to the latter’s increased background levels.
□ Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
□ References
1. Quick & Reversible Control of Your Protein of Interest (April 2008) Clontechniques XXIII(2):1-2.2. Live Cell Reporters, Now with Lentiviral Delivery (April 2009) Clontechniques XXIV(2):14-15.
