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제품특징
□ 특징
● Bicinchoninic acid (BCA) 시약을 이용한 단백질 정량 kit
● 간단한 조작으로 단시간에 단백질 정량 가능
● 단백질 종류에 영향을 받지 않아 0.02~2 mg/㎖의 넓은 범위에서 단백질 정량 가능
● 계면 활성제에 의한 영향을 받지 않음
□ 제품 설명
TaKaRa BCA ProteinAssay Kit은 매우 높은 감도의 발색 반응(colormetric)을 이용하여 단백질의 양을 정량하며, 계면활성제로가용화된 단백질의 정량도 가능하다. BCA 단백질 정량의 원리는 2단계로 이루어진다. 첫 번째 단계는 알칼리성(약 염기성)용액내의 정량하려는 단백질의 펩타이드 결합에 의해 Cu+2이Cu+1으로 환원된다(biuret reacton).이 때, 환원된 Cu+1의양은 용액에 포함된 단백질의 양에 비례한다. 두 번째 단계에서 2분자의 Bicinchoninic acid (BCA)가 환원된 Cu+1와배위 결합하여 562nm에서 강한 흡광도를 나타내는 파랑-보라색의화합물을 형성한다. 이것을 분광 광도계(spectrophotometer)를사용하여 측정 및 정량한다. BCA에 의한 단백질 정량은 단백질의 종류에 따른 차이가 적어0.02~2 mg/㎖의 넓은 범위에서 정량이 가능하며, 계면활성제에 의한 영향을 받지 않는다. 하지만, 환원제 및 킬레이트계 물질은 반응성에 영향을 주기 때문에, 해당 물질이 포함된 용액의 정량에는 적합하지 않다(공존물질의 영향은<표. 1> 참고).단백질의 정량은 본 제품에 포함된 BSA 표준물질을 사용하여 검량 곡선(standard curve)을작성 후 샘플의 농도를 결정한다.
그림 1. Standard Curve for BSA from 0 - 2,000 μg/㎖
□ 내용
1 ㎖ 반응 시 500회, microtiter plate를 이용한 200 ㎕ 반응 시 2,500회의 측정을 할 수 있다.
| 1. BCA Reagent A | 250 ㎖×2 |
| 2. BCA Reagent B | 20 ㎖ |
| 3. BSA Standard Solution (2 mg/ml)* | 1 ㎖×10 |
* : BSA Standard Solution은 안정화를 위해 0.9% NaCl, 0.05% NaN3 를 포함한다.
□ 보존
BCA reagent A, BCA reagent B : 실온 BSA Standard solution : 4℃ *본 제품은 상온에서 배송됩니다. 제품 수령 후 BSA Standard Solution은 4℃에 보관하세요.
□ 제품 이외에 필요한 것
● Spectrophotometer and compatible 1 ㎖ cuvette
● Microplate reader and compatiblemicroplate
● Benchtop centrifuge
● Microtubes (2 ㎖ or 1.5 ㎖)
● Water bath (37℃)
● Incubator (60℃) (for the low-concentrationmeasurement protocol)
□ 단백질 정량 샘플에 공존 물질에 의한 영향
BCA 방법은 비교적 계면활성제나 Buffer에 대한 영향을 받지 않지만, 고농도의 킬레이트계 및 환원제 물질은 측정에 영향을 준다. <표. 1>에는 측정에 영향을 주지 않는 농도를 표기하였다.<표. 1> 단백질 정량 샘플의 공존물질 허용농도
□ 단백질 종류에 따른 영향
BCA assay는 단백질 종류에 따른 측정 값의 변동이 적다는 특징이 있다.<그림. 2>는 일반적으로 사용되는 표준물질 BSA와 BGG를 단계희석 후 측정하여 표준곡선을 작성하였다. <표. 2>는 15종류의 단백질의 발색률을 BSA의 발색률과 비교하였다.
<그림. 2> 0~2,000 μg/㎖ 농도 범위의 BSA와 BGG의 표준 곡선<표. 2> 표준 프로토콜의 BSA에 대한 각종 단백질의 발색률
*Ratio: (각종 단백질의 흡광도 평균값) / (BSA의 흡광도 평균값)
