(1）可能为转染效率低a.优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达荧光蛋白质粒）；b.确保转染DNA的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对DNA质量进行鉴定；c.选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。(2）可能为启动子活性低或诱导失败a.转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；b.优化细胞的培养条件，提高萤光素酶的表达量；c.更换强启动子（如SV40、CMV）。注：海肾萤光素酶基因作为内对照，其表达应不受时期、部位、环境影响，因此常用组成型表达的TK启动子。(3）样品裂解效率低a.细胞培养时间不宜过长，12-36h内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。b.加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。(4）检测过程操作不规范a.选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；b.需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；c.室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物，底物工作液等）都需要调整到室温；d.萤光素酶的半衰期一般约30min，加完底物后可立即检测，尽量在30min内完成。(5）底物氧化失效a.底物避光密封保存，萤火虫荧光素酶底物-20℃保存；海肾萤光素酶底物推荐-80℃保存；b.反应工作液建议现用现配。◆进行检测的过程中，萤光信号值太高该如何进行调整？（1） 减少质粒转染量。（2）细胞样品裂解后，离心取上清后检测或对裂解产物进行稀释后检测。注：不建议通过减少底物量来降低荧光值，需要保证底物的饱和来反映萤光素酶真实的表达水平，否则会造成检测结果出现大的偏差。