CanbeoxidizedbyRenillaluciferases(Rluc)butnotGaussialuciferase.Itisusedforreal-timedetectionofcalciumions,genereporterassaysandafavoredsubstrateforBRET.Thisderivatehasanemissionmaximumaround400nmandthereforeminimalinterferencewiththeemissionoftheGFPacceptor.

CompoundID:	Coelenterazine400a,1-bisdeoxycoelenterazine,di-dehydrocoelenterazine,DeepBlueCTM
CAS#	70217-82-2
IUPACName:	2,8-DIBENZYL-6-PHENYL-IMIDAZO[1,2A]PYRAZIN-3-(7H)-1; BISDEOXYCOELENTERAZINE
MolecularFormula:	C26H21N3O
MW:	391.5
Structure:

HowtoUseCoelenterazine400a

CertificateofAnalysis    HPLC     MSDS    NMR

Theluciferinisshippedasfiltered,lyophilized,batchcontrolledsubstrate
in500µgaliquots(1mg=2x500µg)andin5mgsand10mgs(2x5mgs)aliquots. 

Theadvantagesoflyophilizedluciferinsare:

• pre-aliquotedinsmallamounts,freshsubstrateforeverysetofexperiments
• longshelf-life(packedunderArgon)
• fastertodissolveduetoitsfinecrystalstructure
• consistentqualitybetweenaliquotes

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Prolume是一家生物技术公司，其核心业务基于新发现的深水海洋生物发光生物基因。这在生物医学研究，药物发现和娱乐方面具有广泛的应用。 NanoLight ®  技术是Prolume公司的，公司注重对海洋生物发光的广泛基础的应用程序。所述NanoLight® 除法致力于提供高质量的试剂科学家，荧光素（NanoFuel®S），重组生物发光蛋白的荧光素酶（NanoLight®S），光蛋白（NanoFlashTM）和荧光蛋白（NanoFluorsTM）。 我们希望为科学，生物技术和制药界提供更明亮，更好的转移萤光素酶和荧光蛋白。     NanoLight 产品介绍： NanoLight ® 荧光素酶载体 NanoFuel ® Luciferins，Luciferases＆Reagents NanoFluor TM GFP载体 NanoTools® IPTG，DTT，抗氧化剂等   一、NanoLights 1、Luciferase Expression Vectors 荧光素酶表达载体 2、Photoprotein Expression Vectors 光蛋白表达载体 二、NanoFuels 1、Luciferins & Substrates 荧光素和基质 2、Coelenterazine腔肠素 3、Coelenterazine - Prolume Purple  腔肠素- 4、Coelenterazine - Water Soluble  腔肠素-水溶性 5、Coelenterazine - Inject-A-Lume  腔肠素-Inject-A-Lume 6、Coelenterazine - Special compounds  腔肠素-特殊化合物 7、Cypridina Luciferin  海萤荧光素荧光 8、Firefly Luciferin & Coenzyme A 萤火虫荧光素和辅酶A 9、Assay Reagents 分析试剂 10、Luciferase Proteins 荧光素酶蛋白质 三、NanoFluors 1、GFP Expression Vectors    GFP表达载体 2、Green Fluorescent Proteins  绿色荧光蛋白 四、NanoTools 纳米工具 1、Antibodies 抗体 1.1Polyclonal Antisera Gluc 多克隆抗血清葡萄糖 1.2Monoclonal Antisera Gluc 单克隆抗血清葡萄糖 1.3Polyclonal Antisera Pt. GFP 多克隆抗血清绿色荧光蛋白 1.4Polyclonal Antisera RR GFP  多克隆抗血清rr-gfp   活体成像试剂（D-Luciferin and Coelenterazine）  活体成像试剂（D-Luciferin and Coelenterazine） — — 生物化学发光检测法（荧光素酶）  背 景： 活体成像技术（optical in vivo imaging）目前主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术，生物发光法是基于荧光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化学发光的原理，将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内，与后期注射入体内的底物发生反应，利用光学系统检测光强度，间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域，常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立，并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。 原 理：         常见的荧光素酶有两种，分别是萤火虫荧光素酶（firefly luciferase，编码基因是luc）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，编码基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下，底物被氧化发光（不同底物光的颜色和波长不同），当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。  D-Luciferin（D荧光素） D-Luciferin：有三种，分别是D-Luciferin, Sodium Salt/D荧光素钠盐、D-Luciferin, Potassium Salt/D-荧光素钾盐和D-Luciferin Firefly,free acid/D-萤火虫荧光素     （1）D-Luciferin, Sodium Salt/D荧光素钠盐 分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O 分子量：320.32 g/mol 纯度：纯（99.7%） 应 用：1）体外化学发光分析（in vitro）；2）活体成像实验（in vivo）；3）高灵敏度ATP分析； 步 骤： Protocol 1：In Vitro Bioluminescent Assays/ 体外生物发光检测 1）用33.3 mL蒸馏水溶解1.0 gD-荧光素钠盐，配制成100 mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。 2）用组织培养基1∶200稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)。 3）去除培养细胞的培养基。 4）待图像分析前，向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。 Protocol 2：In vivo analysis / 活体成像分析 1）用无菌的PBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制D-荧光素钠盐工作液(15mg/mL)，0.2um滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。 2）注射量取决于注射方式，具体如下： 注射方式 剂量 静脉注射（25-27 gauge针头） 按10 uL/g体重浓度，加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液 腹腔注射（25-27 gauge针头） 按10 uL/g体重浓度，加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液 肌肉注射（27 gauge针头） 50 uL，浓度为1–2 mg/mL荧光素工作液 鼻内注射（pipette） 50 uL，浓度为3 mg/mL荧光素工作液 3）注射入体内5-10分钟后，进行成像分析。  （2）D-Luciferin, Potassium Salt/D-荧光素钾盐; 分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O 分子量：320.32 g/mol 纯度：纯（99.7%） 应用：1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析； 2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析； Protocol 1：In Vitro Bioluminescent Assays/ 体外生物发光检测 1）配制成100 mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。 2）用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液，配制工作液(终浓度150μg/mL)。 3）去除培养细胞的培养基直至无残留。 4）图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。 Protocol 2：In vivo analysis in mice / 小鼠活体成像分析 1）用无菌的DPBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL)，0.2um滤膜过滤除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。 2）按10 μL/g体重的浓度向每支小鼠注射相应量的15mg/mL荧光素溶液； 3）腹腔注射10-15 min后进行成像分析。（对每只动物模型做荧光素动力学研究以确定峰值信号获取时间） （3）D-Luciferin Firefly,free acid/D-萤火虫荧光素 分子式：C11H8N2O3S2 分子量：280.330 g/mol 外观：白色至浅黄色粉末 溶解：0.25%浓度溶解于甲醇，形成近乎无色至浅黄色的清夜 保存：-15°C 避光 应用：1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析； 2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；     订购信息：       Coelenterazine腔肠荧光素   Coelenterazine：普遍认为是天然的腔肠荧光素，是海肾荧光素酶（Rluc）的作用底物，具有许多用途。可用于检测活细胞中钙离子浓度，基因报告分析，BRET（生物发光共振能量转移）研究，ELISA，HTS，组织或细胞中超氧阴离子和过亚硝酸盐的化学发光检测。 Coelenterazine h:与Renilla荧光素酶或Gaussia荧光素酶使用具有一定的局限性。体外研究中比其他类似物更适合与钙离子激活发光蛋白共用。据报道，Coelenterazine h的发光强度高于天然腔肠荧光素10-20倍，因此是用来检测钙离子浓度微小变化的有力工具。 Coelenterazine 400a: 是BRET研究中Rluc的优先选择底物，此腔肠素衍生物在390 nm和400nm之间发蓝色光，对GFP acceptor的光发射干扰小。 （1）Coelenterazine（天然腔肠荧光素） 分子式：C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol 纯度：95% 保存：-15°C避光，保存在惰性气体下 Protocol：发光检测实验 1）使用管光度计室温下定量检测发光情况，每个样品做三个平行； 2）加入底物10s内立即检测，“integration time”为1 s； 3）对于细菌表达Gluc系统，甲醇溶解底物腔肠素制备10 mM储存液，终浓度为10μmol/L。储存液-20 °C保存，工作液制备过程需避光并置于冰上。  （2）Coelenterazine 400 a/腔肠素400a 分子式：C26H21N3O 分子量：: 391.48 g/mol 纯度：95% 储存液制备： 1）开封前将瓶子放到室温温育，以避免产品发生任何的冷凝； 2）用125 μL无水乙醇溶解50 μg Coelenterazine 400 a，终浓度是0.4μg/μL. ，轻轻混匀；（注：避免用DMSO或其他溶剂来溶解腔肠素400a，因为试剂可能被氧化） 3）分装后避光保存在-20°C，保持干燥；  （3）Coelenterazine h/ 腔肠素h（from Caliper LifeScience Inc.） RediJectCoelenterazineh为即用的注射型生物发光底物，特别设计用于体内成像研究。通过小化产品成分的变化，小化冻融次数和严格控制不同批次的产品，使用Caliper公司的Coelenterazine h能确保客户得到高重复性的结果。 优 点： ◆预制配方，不同批次间严格控制特别设计用于体内研究； ◆即用型产品通过小化预成像准备步骤，减少时间和精力； ◆每瓶可用于5只动物的成像研究；（10 瓶/kit） ◆经IVIS成像系统验证，控制体内成像质量； 颜色：黄色溶液（溶于丙二醇/柠檬酸盐） 浓度：150 μg/mL （10瓶无菌溶液，每瓶含1.2 mL浓度为150 μg/mL的Coelenterazine h ） 保存： Store at ≤ -70 °C。 使用及注射剂量： 开始实验前，37 °C水浴锅解冻，避免重复冻融。静脉注射(i.v.)或腹腔注射(i.p.)。 1.        静脉注射：推荐使用剂量15 μg/mouse(100 μL/mouse），用1 ml注射器直接从瓶内吸取溶液，然后用25 gauge或更高的针头注射入小鼠体内。尽快成像检测以获得峰值信号。 2.        腹腔注射：推荐剂量是30 μg/mouse (200 μL/mouse)，方法同上。