Pre-mademicroRNAexrepssionlentivirusforhumanhsa-miR-101-3p(MIMAT0000099):

The humanmicroRNA precursorsanditsnativecontextsequences(upstreamanddownstreamflankinggenomicsequences)wasclonedintoaGentarget’smiRNAexpressionlentivector: pLenti-TetCMV(GFP-3UTR/miRNA)-Rsv(Puro).ThemiRNAclonedat3’UTRorGFPMarkerunderanoptionalinducIBLeCMVpromoter. ItcanbeusedforconstitutivemiRexpressionorusedasinduciblemiRexpressionwhentheTetRrepressorisprescent.TheGFPsignalprovidesareal-timemonitorforthemiRNAexpressionlevelsandthelentivirustransductionefficiency.

TheclonedmiRNAexpressprecursorsequenceislistedbelow.Note: theRed-highlightedregionisthemiRStem-loopsequence: 

AGAAGGTGATCTTTTAGTCCTTCACTTCATGGGGAGCCTTCAGAGAGAGTAATGCAGCC

ACCAGAAAGGATGCCGTTGACCGACACAGTGACTGACAGGCTGCCCTGGCTCAGTTAT

CACAGTGCTGATGCTGTCTATTCTAAAGGTACAGTACTGTGATAACTGAAGGATGGCAG

CCATCTTACCTTCCATCAGAGGAGCCTCACCGTACCCAGGAAGAAAGAAGGTGAAAGA

GGAATGTGAAACAGGTGGCTGGGACCCAGAAACCCTCTTAC

ItguaranteestogeneratethematuredmiRNAsequenceasfollows:

UACAGUACUGUGAUAACUGAA

See Producemanual fordetails.

Amounts: 

1)500ulof ready-to-usespecificmiRNAexpressionlentivirusinDMEM-mediumcontaining60ugpolybrene(10x).

2)500ulof ready-to-use Negative-controlmiRNAexpressionlentivirusinDMEM-mediumcontaining60ugpolybrene(10x).(Note:ThemiR-Control doesnottranscribeanymiRNAsequences,buthasthesamebackbonewithGFPmarker).

Virustiter: 1×10⁷ IFU/ml,

Shipping: overnightshipmentindry-icepackage.(Note:Thisproductispre-madeinstock,readytoshipviaovernightdry-icepackage)

CAT#:miR#73

GentargetInTag™跨膜蛋白什么是InTag™跨膜蛋白？GenTarget的InTag TM高效蛋白质递送系统使您可以将蛋白质直接引入细胞，其效率比poly-A融合标签高10到40倍，而对蛋白质功能几乎没有影响。InTag TM蛋白递送方法的优点：高效的蛋白质输送–功能分析所需的蛋白质更少能够传递大蛋白（> 1000个氨基酸）与细胞类型无关—可以与许多不同的哺乳动物细胞一起使用快速交付，可轻松获得蛋白质功能（<5分钟）蛋白质功能的可逆传递非侵入性递送—只需添加到细胞培养中可控制的递送-通过改变浓度与靶向蛋白融合后的靶向递送 将蛋白质直接引入细胞是研究蛋白质功能的关键步骤。与DNA转染不同，在DNA转染中，将转录活性基因导入通过细胞机制制造蛋白质的活细胞中，蛋白质递送不会引入任何外源DNA，并且与细胞转录和翻译机制无关。因此，它避免了在宿主基因组中发生插入诱变的潜在风险，并且所传递的蛋白质在进入细胞后立即起作用。已经开发了几种蛋白质递送方法，包括电穿孔，显微注射，蛋白质融合和传统的阳离子脂质载体。在这些方法中，蛋白质融合传递  无疑是最容易与非细胞毒性蛋白质一起使用的方法，  并且适用于大规模应用。因此，这是最有吸引力的治疗方法。蛋白质融合递送取决于被称为蛋白质转导结构域（PTD）的短阳离子肽，该肽与目标蛋白质融合。通常包含多个（7〜15）精氨酸的PTD可以通过不完全了解的机制有效地穿过质膜。在许多病毒蛋白中发现的天然PTDs具有转运质膜的能力。其中包括来自HIV-1的TAT蛋白，流感病毒血凝素蛋白（HA2），单纯疱疹病毒1（HSV-1）DNA结合蛋白VP22和果蝇触角（Antp）同源转录因子。根据噬菌体筛选和点突变筛选的结果，GenTarget已开发出InTag TM，这是一种专有的高效蛋白质递送系统，采用了工程化的PTD。根据细胞类型的不同，具有37个氨基酸的InTag TM PTD对靶蛋白功能几乎没有影响，并且显示出比聚精氨酸融合标签高10到40倍的效率。与InTag TM PTD 融合的靶蛋白可以有效地传递到各种活细胞中。Gentarget的InTag TM  蛋白质递送结构域已整合到我们的Eco PCR克隆产品（目录号：即将推出）中，可用于大肠杆菌或哺乳动物表达  转染就绪的蛋白质。纯化后，可以将用InTag TM PTD 表达的蛋白简单地应用于培养的哺乳动物细胞，以进行体外功能测定。GenTarget还提供了许多纯化的，可转染的蛋白（请参阅产品链接）。