磷酸酶，碱性测定
分析（鸡肠酶）
方法：磷酸酶活性的测定是基于Brandenberger和Hanson（1953）和Hofstee（1954）的工作。确定了该酶对邻羧基苯基磷酸酯的初始水解速率的催化作用。与磷酸酯不同，水杨酸最大吸收约300 nm的光。因此水解率可以通过吸光度的增加来确定。在规定的条件下，一个单元在25°C和pH 8.8下每分钟水解一微摩尔的邻羧基苯基磷酸酯。
试剂种类
- 0.1 M Tris·HCl，pH 8.5
- 0.2 M甘氨酸，pH 8.8
- 0.05 M氯化镁
- 3.65 mM邻羧基磷酸苯酯（OCPP）
酵素
以1 mg / ml的浓度溶于0.1 M Tris-HCl，pH 8.5（原液）中。活化后可能需要进一步稀释。
程序
通过在25°C水浴中将mg / ml溶液孵育20-30分钟来激活酶。
将分光光度计调节至300 nm和25°C。
移液到每个比色皿中，如下所示：
| 0.2 M甘氨酸，pH 8.8 |
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