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核酸检测的一场革命,可替代PCR的犀利技术资讯...

mayitao /发布时间:1626802201 /浏览量:160

RPA(恒温扩增)技术应用于肿瘤基因检测

　　TwistDX“三大护法”试剂盒操作视频

　　RPA引物筛选及设计原则

　　真正的核酸检测革命：单分子!37℃恒温!15分钟!

　　肿瘤基因相关基因检测在癌症早期诊断中意义重大。目前的检测金标准为PCR和基因测序技术，而这些技术大多需要精密的仪器和复杂的试验流程，专业的实验人员配置。在现有的分子诊断技术中，以RPA为代表的核酸等温扩增技术以其快速，灵敏，无需仪器等特点，使突破以上壁垒成为可能。

　　近日，大连医科大学刘元斌课题组发明一种无需任何仪器，实现快速检测突变基因并肉眼识别的新方法，被称为AS-RPA-PNA-SYBR(ARPS)system。该方法以RPA(重组酶聚合酶恒温扩增技术)为基础，加之PNA技术(肽核酸类似物)，并利用SYBRGreenI核酸染料法显色，肉眼即可判断核酸扩增与否。
　　文章中，作者比较了在PCR，测序以及ARSP在非小细胞肺癌中EGFR突变检测应用，发现在非小细胞肺癌细胞系中，5分钟便能检测到EGFR19Del(2)缺失突变，10分钟检测EGFRLSNP突变，实现肉眼快速判断(图1)，并在组织样本中同样得到验证(图2)。
　　同样，10到20分钟之内成功检测到EGFR点突变。与传统的DNA测序方法相比较，ARPS有着许多优势之处，包括时间短，成本低，操作简单，无需精密仪器等，而且，在基因组DNA样本中，ARPS可以检测到30%和40%的靶向突变位点，灵敏度与测序相当(图3)。之前有文章报道称，RPA技术与末端荧光检测和胶体金侧流试纸条以及微流控芯片结合检测EGFR突变，但还没有类似ARSP肉眼观测法的应用。
　　然而，ARSP法同样有待于进一步优化。比如，对于每一次EGFR检测来说，检测灵敏性和特异性都还有待提高;由于样本量有限，现仍需更多的临床样本实验进行验证。无论如何，在精准医疗大背景下，对于一些没有条件购买测序仪，以及不具备专业操作能力的不发达地区和国家，这种快速简便，操作简单的，无需任何仪器的ARSP基因检测法无疑为癌症基因检测提供有效参考，同时也为分子即时诊断领域(POCT)提供新的潜在解决方案。

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