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SPA 各种免疫检测试剂制备实验一SPA 纯品
蚂蚁淘
/发布时间:1533685089 /浏览量:307
| 实验方法原理 | SPA纯品系由含A蛋白的CowanI株金黄色葡萄球菌中纯化获得。其制备过程除细菌培养外，主要有提取和纯化这两个工艺组成。提取方法多种，其中溶葡萄球菌素与亲和色谱组合方法最有效。现介绍如下。 | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 菌苔 试剂、试剂盒 | Tris·HCl碳酸氢铵溶葡萄球菌素饱和硫酸铵 仪器、耗材 | DEAE-SephadexA50IgG-Sepharose4B亲和层析柱
实验步骤 | 1.用0.05mol/L（pH7.5）的Tris·HCl洗下菌苔，每100g湿菌加溶葡萄球菌素5mg，调节pH值到3.5，离心后取上清，并将pH值调到7.0。 2.用饱和硫酸铵沉淀，溶解透析，透析物用DEAE-SephadexA50纯化，以0.1mol/L碳酸氢铵（NH4HCO3）平衡后上样，再平衡过夜。 3.用0.4mol/LNH4HCO3洗脱（流速1.5ml/min），样品测定A275nm和活性，将含活件者合并、浓缩、冻干保存于-40℃中。 4.上述纯化获得的SPA可进一步用IgG-Sepharose4B亲和层析柱过滤，进一步纯化SPA。 5.纯度鉴定用7.5％聚丙烯酰胺凝胶为分离系统进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，样品浓度为1mg/ml，加样量为40μl。电泳结果应显示一条明显条带。 注意事项 | 展开 其他 | 展开
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