货号

:

QS3115

规格：

50

管

/48

样

乙酸激酶（

acetatekinase

，

ACK

）试剂盒说明书

紫外分光光度法

正式测定前务必取

2-3

个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

ACK

主要存在于微生物中，催化乙酸和

ATP

生成乙酰磷酸和

ADP

，是细菌碳代谢和能量代

谢的关键酶，尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。

测定原理：

（

1

）

ACK

催化乙酸钠和

ATP

生成乙酰磷酸和

ADP

；

（

2

）丙酮酸激酶催化

ADP

和

PEP

生成

ATP

和丙酮酸；

（

3

）乳酸脱氢酶催化丙酮酸和

NADH

生成乳酸和

NAD

+

；

（

4

）在

340nm

下测定

NADH

氧化生成

NAD

+

速率，即可反映

ACK

活性；

自备实验用品及仪器：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、

1mL

石英比色皿、研钵、冰和蒸

馏水

试剂组成和配制：

提取液：液体

50mL

×1

瓶，4℃保存；

试剂一：液体

50

mL×1

瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×

1

瓶，

4

℃保存；临用前每瓶加入

4mL

蒸馏水，充分溶解待用。用不完的

试剂仍

4

℃保存；

试剂三：粉剂×

2

瓶，

-20

℃保存；临用前每瓶加入

4mL

蒸馏水，充分溶解待用；用不完

的试剂仍

-20

℃保存；

试剂四：粉剂×

2

瓶，

-20

℃保存；临用前每瓶加入

2.5mL

蒸馏水，充分溶解待用；用不

完的试剂仍

-20

℃保存；

试剂五：粉剂×

2

支，

-20

℃保存；临用前每支加入

1mL

蒸馏水，充分溶解待用；用不完

的试剂分装后

-20

℃保存，禁止反复冻融。

试剂六：液体

800

μ

L×

2

支，

4

℃保存；临用前每支加入

720uL

蒸馏水，充分溶解待用；

用不完的试剂

4℃保存；

试剂七：粉剂×

2

支，

-20

℃保存；临用前每支加入

800uL

蒸馏水，充分溶解待用；用不

完的试剂

4℃保存；

试剂八：粉剂×

2

瓶，

4

℃保存；临用前每瓶加入

4mL

蒸馏水，充分溶解待用。用不完的

试剂仍

4

℃保存。

样本的前处理：

1

、

细菌或培养细胞：

先收集细菌或细胞到离心管内，

离心后弃上清；

按照细菌或细胞数量

（

10

4

个）

：提取液体积（

mL

）为

500~1000

：

1

的比例（建议

500

万细菌或细胞加入

1mL

提取液）

，超

声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率

20

％或

200W

，超声

3s

，间隔

10s

，重复

30

次）

；

15

000g

4℃

离心

10min

，取上清，置冰上待测。

2

、组织：按照组织质量（

g

）

：提取液体积

(mL)

为

1

：

5~10

的比例（建议称取约

0.1g

组织，加

入

1mL

提取液）

，进行冰浴匀浆。

15

000g4℃离心

10min

，取上清，置冰上待测。

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