- SubculturingAdherentCells资讯
- 1%聚山梨醇酯80玉米粉琼脂培养基的使用方法
- Alexis Holdings Corporation企业信...
- 没食子酸丙酯 CAS#: 121799
- INDOOR Biotechnologies代理INDOOR...
- 苯甲酸丁酯 苯甲酸丁酯批发价格、市场报价、厂家供应 百度...
- 彩色预染蛋白marker(10180kDa)试剂_试剂北京杰...
- SANGSHIN ELECOM CO., LTD.
- DL丙氨酸乙酯盐酸盐 | 617276
- 怎样才能增强免疫力_
- 多克隆抗体的抗血清该如何冻存?
- 宿主细胞残留蛋白HCP_使用方法上海睿玥实验器材有限公司
- [06-03]【上臂+副乳吸脂第7天】这几天就一个感受:终于摆脱_圈子新氧...
- [12-01]做与脂代谢有关的实验用肝癌细胞系代替肝细胞可以吗
- [10-17]固体脂质纳米粒的研究概述
- [12-10]请教各位老师吸脂间隔时间 专科麻醉 新青年麻醉论坛
- [11-27]四君子汤对训练小鼠血清和肝脏自由基变化影响的实验研究
- [12-13]脂血标本对丙肝病毒RNA定量检测结果的影响
- [12-05]材料与方法标本的收集和肝匀浆的制备造模至第 天给予 岍小鼠模型...
- [07-05]大腿吸脂术后60天可以脱掉一层皮了
- [12-07]高脂血症为什么易引起急性胰腺炎_高脂血症_
乙酰胆碱酯酶测定试剂盒 微量法
产品内容:
提取液:液体70mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体30mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入5.2mL试剂一,充分震荡溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入2.6mL试剂一,充分震荡溶解。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入5mL蒸馏水溶解备用。
产品说明:
乙酰胆碱酯酶(AchE)属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱(Ach)水解,在神经传导调节中起重要作用。
AchE催化Ach水解生成胆碱,胆碱与二硫对*****甲酸(DTNB)作用生成5-巯基-*****甲酸(TNB);TNB在412nm处有吸收峰,通过测定412nm吸光度增加速率,计算AchE活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板,匀浆器/研钵,蒸馏水。
操作步骤:
一、 粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,8000g4℃离心10min,取上清液待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
二、 测定操作:
1. 可见分光光度计预热30min,调节波长到412nm,蒸馏水调零。
2. 操作表:
试剂名称
测定管
对照管
样本
15
15
试剂二
50
-
37℃水浴准确反应5min。
试剂四
50
50
试剂二
-
50
混匀后12000rpm常温离心5min。分别吸取10μL上清液
于新的EP管或96孔板中,之后分别加入。
试剂一
170
170
试剂三
20
20
混匀,放置2min后于微量玻璃比色皿中或96孔板中测定412nm处的吸光度,记为A测定管,A对照管,计算ΔA=A测定管-A对照管。
三、 AchE活性计算公式:
A.用微量玻璃比色皿测定的计算公式:
1. 组织AchE活性
(1) 按照蛋白浓度计算
活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmolTNB为1个酶活单位。
AchE酶活(U/mgprot)=[ΔA÷ε÷d×V显色×109]÷(Cpr×V样×V上清÷V酶促)÷T
=2255×ΔA÷Cpr。
(2) 按照样本质量计算
活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmolTNB为1个酶活单位。
AchE酶活(U/g)=[ΔA÷ε÷d×V显色×109]÷(W×V样÷V样总×V上清÷V酶促)÷T
=2255×ΔA÷W。
2. 细菌、细胞AchE活性
活性单位定义:每104个细胞每分钟催化产生1nmolTNB为1个酶活单位。
AchE酶活(U/104 cell)=[ΔA÷ε÷d×V显色×109]÷(细胞数量×V样÷V样总×V上清÷V酶促)÷T
=2255×ΔA÷细胞数量
3. 血清AchE活性
活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生1nmolTNB为1个酶活单位。
AchE酶活(U/mL)=[ΔA÷ε÷d×V显色×109]÷(V样×V上清÷V酶促)÷T=2255×ΔA
ε:TNB摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;V显色:显色反应体系总体积(L),1mL=2×10-4L;109:1mol=1×109nmol;V酶促:酶促反应总体积,0.115mL;V上清:吸取上清液体积,0.01mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);W:样本质量,g;V样:加入样本体积(mL),0.015mL;T:反应时间(min),5min;细胞数量:提取时的细胞数量,万个。
B.用96孔板测定的计算公式:
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
注意事项:
1.测定过程中样本和工作液在冰上放置,以免变性和失活。
2.当吸光值大于1时,建议将样本稀释后测定。
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明:本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容
版权声明:未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘在线”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。