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被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定,如果待检溶液中抗原越多,被结合的标记抗原的量就越少,有色产物就减少,这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测;其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记,而且因为抗原的结构不同,还需应用不同的结合方法。此外,试验中应用酶标抗原的量较多。5.阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(TGE)、猪伪狂犬病(PR)及猪胸膜肺炎(AP)的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测法为例介绍其操作程序:①100μlAP2型工作量抗原包被→4℃过夜,洗涤三次、抛干②用200μl阻断缓冲液进行封闭→37℃60分钟,洗涤三次、抛干③加工作量1:4稀释被检猪血清100μl→37℃60分钟,洗涤三次、抛干④加100μl工作量兔抗AP2型血清→37℃30分钟,洗涤三次、抛干⑤加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP→37℃60分钟,洗涤三次、抛干⑥加100μlOPD底物液→37℃20分钟,加终止液⑦用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。
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