相关文章
- 方案14蛋白质阵列:用“三明治法”研究复合体溶液资讯分析测试...
- 实验室洗瓶机_全自动洗瓶机_进样瓶洗瓶机_玻璃器皿清洗消毒机...
- 在DNA重组中,催化形成重组DNA分子的酶是A.拓扑异构酶B...
- 美国最高法院裁定:人类基因不得申请专利中国法院网
- 基因工程常用工具酶及应用_图文
- Chk1抑制剂(SCH900776)
- SMTC 70001 零部件验证和可追溯性条码标签规范(08...
- J Infect :中国首例H10N8甲型禽流感死亡病例引发...
- soda(soda软件)萝卜建站
- ⭐翼の夢 舞の城⭐聯盟 女性向游戏 网王舞台剧 声优广播剧 ...
- 热烈祝贺达科为成为IBA中国独家授权代理商!_行业动态_达科...
- 生物安全柜与超净工作台和通风橱的区别
促销商品
最新问答
- [03-11]DNA复制时下列哪一种酶是不需要的？（）A DNA聚合酶B RNA聚合酶...
- [03-28]ChartCube 在线图表制作工具
- [08-16]教您正确选择逆转录酶,适用6种不同应用
- [08-02]【求助】反转录酶AMV和MMLV有什么不同？ 经验共享 分析测试百...
- [08-08]MMLV RNase H反转录酶说明书
- [03-17]为什么Access RTPCR系统不使用MMLV反转录酶而使用AMV反...
- [08-01]反转录酶的注意事项有哪些?反转录酶的注意事项有哪些?
- [03-11]基因工程习题与考纲_文档下载
- [08-15]逆转录和反转录有什么区别?
精选品牌
热卖商品
各位大侠：小弟最近做个长片段的CDNA与T载体的连接，片段大小6.4K，载体选用的是pUC19和pGEMT-easy,反转录酶用的是RevertAidTirstStrandcDNASynthesisKit(#K1621)，CDNA第二链的扩增用的是LATaq。我是用纯病毒的RNA做模板，操作步骤严格按照说明做的，也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段，与载体连接，结果筛选到的几个克隆，插入的片段仅有2KB左右，奈何？可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此，小弟想问问大家，你们是否遇到同样的问题，是如何解决的？所用的试剂（载体和酶的选择）和方法是什么，可以告诉后来者，共同进步吧。
相关回复
-
已帮助 0人
-
已帮助 0人
-
回复：时间：2008-01-16
我想主要是你的片段比较大，虽然如你所言，能够通过RT－PCR得到你要的片段。但筛选到的克隆通常仅有2kB左右。我认为这很可能是质粒的稳定性问题。我记得看过Epicentre公司和Lucigen公司的一些实验tipsandtroubleshooting之类的资料。这些公司的专家声称有一些DNA片段就是特别难以克隆，他们常常采用的措施是降低克隆质粒的拷贝数，使用transcription－free的质粒，比如lucigen公司就有这类质粒。当然，我没有用过这两家公司的任何产品，只是经常到他们的网页浏览，看看有什么新东西。我目前常用的克隆载体是Fermentas公司的CloneJET试剂盒，克隆3kB的片段的效率都很高，远远优于Takara公司的pMD18T－simple。以上意见仅供参考
相关问题
- 1520722209DNA复制时下列哪一种酶是不需要的？（）A DNA聚合酶B RNA聚合酶...
- 1522227416ChartCube 在线图表制作工具
- 1629050403教您正确选择逆转录酶,适用6种不同应用
- 1627840802【求助】反转录酶AMV和MMLV有什么不同？ 经验共享 分析测试百...
- 1628359203MMLV RNase H反转录酶说明书
- 1521280964为什么Access RTPCR系统不使用MMLV反转录酶而使用AMV反...
- 1627754402反转录酶的注意事项有哪些?反转录酶的注意事项有哪些?
- 1520780255基因工程习题与考纲_文档下载
- 1628964001逆转录和反转录有什么区别?
- 1522708190反转录酶的主要用途
- 1629396002RNA病毒怎么在体内逆转录,首先逆转录酶哪里来,然后引物咋来的? ...
- 1519758035逆转录
推荐产品
