2021-08-05【求助】大片段DNA（6.4K）与载体连接所需的载体，反转录酶，PCR聚合酶的选择！！！

已过了一周了，大侠还没有出现，期待中...............

我想主要是你的片段比较大，虽然如你所言，能够通过RT－PCR得到你要的片段。但筛选到的克隆通常仅有2kB左右。我认为这很可能是质粒的稳定性问题。我记得看过Epicentre公司和Lucigen公司的一些实验tipsandtroubleshooting之类的资料。这些公司的专家声称有一些DNA片段就是特别难以克隆，他们常常采用的措施是降低克隆质粒的拷贝数，使用transcription－free的质粒，比如lucigen公司就有这类质粒。当然，我没有用过这两家公司的任何产品，只是经常到他们的网页浏览，看看有什么新东西。我目前常用的克隆载体是Fermentas公司的CloneJET试剂盒，克隆3kB的片段的效率都很高，远远优于Takara公司的pMD18T－simple。以上意见仅供参考