货号：	G019-1
样本：	动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织
标记物：	CD26,CD27,CD28,CD30
适应物种：	血清，血浆
应用：	通用型
检测方法：	分光光度法
检测限：	6个月
供应商：	上海雅吉生物科技有限公司
数量：	100
规格：	50T/100T

【中文名称】：细胞周期检测试剂盒（微板比色法）
【所属类别】：仅供科研
【规格】：50T 20T
【检测方法】：分光光度法
【保存方法】：4℃保存6个月；避免反复冻融
定义：细胞坏死和凋亡是两种截然不同的细胞学现象，二者发生的过程在形态学上有很大的区别。在细胞坏死时，细胞膜发生渗漏，细胞内容物包括细胞器及染色质释放到胞外。而在细胞凋亡过程，起始阶段，染色质固缩、分离并沿核膜分布，细胞质亦发生固缩，但细胞膜依然完整未失去选择透性；在凋亡后期，核染色质断裂为大小不等的片断，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜包围，后逐渐分离，形成凋亡小体。
细胞周期检测试剂盒（微板比色法）操作步骤
（1）使用前低速离心，以免液体积存管盖和管壁；
（2）本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
（3）PI（propidiumiodide，溴化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
（4）AnnexinV-FITC和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。在处理和标记时，尽可能在暗处进行。在孵育阶段，用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后，在暗室内用显微镜观察；
（5）整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作，以免影响细胞状态。
（6）在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果。
（7）为防止荧光衰变，宜在1小时内进行流式检测。
（8）PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行AnnexinV-FITC染色，最短可在上机前5分钟再加入PI染色。

细胞周期检测试剂盒（微板比色法）相关产品如下：

G002-2	TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 （荧光及显色法，石蜡切片）	20T	1800元
		50T	2800元
G002-3	TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 （荧光及显色法，冰冻切片）	20T	1800元
		50T	2800元
G002-4	TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 （荧光及显色法，细胞样本）	20T	1800元
		50T	2800元
G003-1	AnnexinV-FITC/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒	10T	380元
G003-2		20T	600元
G003-3		50T	980元
G004-1	AnnexinV-EGFP/PI双染 细胞凋亡检测试剂盒	10T	380元
G004-2		20T	600元
G004-3		50T	980元
G005-1	AnnexinV-PE 细胞凋亡检测试剂盒	10T	600元
G005-2		20T	900元
G005-3		50T	1600元
G006	线粒体提取试剂盒	50T	800元
G007	线粒体/细胞核提取试剂盒	50T	800元
G008-1	线粒体蛋白提取试剂盒	50T	980元
G008-2		100T	1680元
G009-1	线粒体膜电位检测试剂盒 （JC-1法）	10T	680元
G009-2		20T	980元
G009-3		50T	1680元

细胞周期检测试剂盒（微板比色法）细胞样本的前处理
一、匀浆介质
一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
二、细胞样本的前处理:
1、细胞沉淀的收集：
①悬浮细胞:对于悬浮培养的细胞，直接通过离心收集细胞沉淀，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。
②贴壁细胞:对于贴壁培养的细胞，用胰酶将细胞消化下来，或用细胞刮将细胞刮下来，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。
我们一般建议客户，细胞密度最好不要小于一百万个/ml。
2、细胞沉淀的洗涤：
在细胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS（等渗），轻轻颠倒混匀，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。
重复上述操作反复洗涤1～2次。
3、匀浆的方式：手工匀浆，超声破碎,裂解液裂解,反复冻融。
①手工匀浆：在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，用移液器将细胞悬浮液移至玻璃匀浆管中（2ml玻璃匀浆管），将玻璃匀浆管置于冰水混合物中，手动匀浆3分钟，然后取破碎好的细胞悬浮液进行测定。
②超声破碎:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，在冰水浴条件下进行如下操作:
   a、用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
   b、用超声细胞破碎仪，300W功率，每次超声3～5秒，间隔30秒，重复4～5次。
③裂解液裂解 
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,这三种去垢剂的作用是不同的，或者说作用力量强弱不同。
1、SDS属于离子型去垢剂，最厉害，基本可以把细胞完全破掉，DNA会释放出来，裂解液变得很粘稠。
2、NP-40是很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40，也是常用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用（SDS基本会使蛋白变性失活）。
去垢剂属性只是一方面，buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素
由于很多裂解液都是蛋白变性剂,对酶活力的测定有一定的影响,一般不推荐用裂解液进行裂解。
④反复冻融:
在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右）。
由于反复冻融对酶活力影响较大,一般不推荐使用