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RNA干扰生工生物生命科学产品与技术服务

mayitao /发布时间:1500664245 /浏览量:17

提供商：	江阴雨汐生物科技有限公司
服务名称：	RNA干扰服务

RNA干扰（RNAinterfering，RNAi）现象是由与靶基因序列同源的双链RNA引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。由于RNAi具有高度的序列专一性和有效的干扰，可以特异地将特定的基因沉默，从而获得基因功能丧失或基因表达量的降低，因此可以作为功能基因组学的一种强有力的研究工具。RNAi技术可广泛应用到包括功能学，药物靶点筛选，细胞信号传导通路分析，疾病治疗等等。我们可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析，完成siRNA/shRNA/miRNA等多种序列的设计，并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi相关的病毒包装、RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

※RNAi服务类别

1、siRNA

对于瞬时基因沉默实验，化学合成siRNA的方法操作简便，容易获得高水平的瞬时沉默效果，特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性；针对某靶基因设计的3条siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到70%（在转染效率大于80%的情况下）。

1.1 普通siRNA：均由HPLC纯化，100％除去尚未配对的单链

1.2 化学修饰siRNA：利用2’-Fluoro或2’－OMe修饰以提高siRNA在血清和培养基中的稳定性；作用时间长于普通siRNA

1.3 荧光标记siRNA

2、RNAi载体

RNAi载体表达可以长时间稳定地研究基因功能，载体在细胞中持续抑制靶基因的表达可达数星期甚至更久。

miR-RNAi载体构建－利用细胞内源性的miRNA加工机制，相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构，并具有采用EmGFP进行表达追踪和顺式表达多个miRNA的优点。针对人类、大鼠、小鼠的大多数基因预先设计好了miRRNAi序列，每个基因设计的4条miRRNAiSelect序列我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的knockdown（在转染效率>80%的前提下）。

2.2 shRNA载体构建—设计针对特定基因的shRNA序列，并将其连入组成型pENTR™/U6或诱导型pENTR™/H1/TO载体中。

3、RNAi导入优化

由于siRNAs是进入细胞后才能对蛋白的表达进行抑制，因此如何高效地将siRNAs转入细胞也是成功抑制基因表达的关键步骤。例如，一个siRNA分子对某特定基因的抑制效率为90%，而转染效率为10%，那么最后抑制蛋白表达最后的效率只有9%，可见如何提高siRNAs的导入效率非常重要。

3.1 RNAi转染优化－为了使得RNAi实验获得最大化的干扰效果，利用脂质体转染试剂技术，针对多种真核生物细胞进行转染参数的优化。RNAi荧光标记的阴性对照、阳性对照可以用于进行转染效率的优化。

3.2 病毒侵染优化－针对难于转染细胞（特别是神经细胞、悬浮细胞、干细胞）和Invivo实验，基于的RNAi病毒载体构建、包装、浓缩等技术，利用腺病毒或慢病毒进行RNAi研究

3.3 筛选RNAi稳定细胞株－利用抗生素来筛选稳定表达shRNA或miRNA的细胞株

4、RNAi干扰效果检测

用实时定量PCR方法检测mRNA水平的基因敲减效果；通过Westerblot方法检测蛋白水平的基因敲减效果

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