- Sadara与HarcrosARA签署供应协议_中国塑料行业...
- 恒温水浴锅功率一般是多少?_土巴兔装修问答
- JO塑胶原料UL File No.[推荐XLS]
- Aeris™ PCR基因扩增仪_
- 脑脊液病原体分子诊断新纪元降临
- MGP试剂盒;小鼠基质Gla蛋白(MGP)ELISA试剂盒_...
- 【jiafu_coating_fluoro_resin】什么...
- Uray天气预报15天_Uray天气预报15天查询_米胖
- 什么是原位PCR仪?——PCR仪的分类_天晴雨依旧
- 细胞进行冷冻保存在冻存前一天更换细胞培养液。 按比例配制细胞...
- 转录调控无参转录组测序最优解决方案_文档下载
- 软琼脂集落形成实验
- [01-21]PCR基因扩增仪按照变温方式的不同可分为哪几类?分别有什么特点?_考试...
- [07-23]【分享】PCR扩增仪大汇总_问答详情_蚂蚁淘,【正品极速】生物医...
- [01-22]美国ABI 9700型PCR扩增仪单槽(96孔)_价格厂家供应商_北京鼎国...
- [01-12]western blot一抗二抗的选择 分子生物 DNA重组论坛学术...
- [07-25]一种连接反应引发的超分支滚环扩增检测miRNA的方法与流程
- [01-12]实时荧光定量PCR仪和基因扩增仪的区别是什么?
- [01-21]ZYDS1恒温荧光检测仪
- [01-21]国际营销:必和必拓BhpBilliton案例分析_图文_
- [01-08]恒温电蜡疗仪恒温电蜡疗仪批发、促销价格、产地货源
PCR实验操作步骤|pcr基因扩增仪|pcr扩增仪|基因扩增技术
PCR是极为重要的DNA增殖技术,应用层面非常广,其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上,要以PCR扩增这段DNA时,可根据质体multiplecloningsites两边的序列,选用适当的核酸引子(universalprimers)进行扩增反应;比较常用的引子包括SP6,T3与T7promoterprimer,M13/pUCforward与reverseprimers等;若有特殊考量,也可以使用序列专一性核酸引子对。进行PCR反应时若同时添加[α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP,所增殖的DNA即被32P或DIG所标定,所以PCR是制备核酸探针非常便捷好用的方法。
仪器用具:微量离心机;PCR反应器
药品试剂:
模版DNA:pBlueGus质体DNA(~50pg)
核酸引子对:T3promoterprimer与T7promoterprimer(各2μM)
矿物油(是否需要视PCR反应器机型而定)
PCRDIGprobesynthesiskit(Roche),内含:
TaqDNApolymerase(ExpandHighFidelity,3.5U/μL)
10×PCRDIGprobesynthesismix(2mMdATP,dCTP,dGTP,1.9mMdTTP,及0.1mMDIG-11-dUTP,pH7.0)
ExpandhighfidelitybufferwithMgCl2(10×)
方法步骤:
以下反应条件主要参照PCRDIGprobesynthesiskit制造厂商所提供的产品说明。
1)取一支0.5mL微量离心管,依下表逐一加入各项试剂(单位μL):
2)以手指头轻弹管壁使各项试剂混合均匀。
3)短暂离心后,徐徐加入100μL矿物油。
◆有些PCR反应器不需使用矿物油。
4)在PCR反应器上设定PCR反应条件:Denaturation:94℃/10min
扩增反应:
30循环的[94℃/45s→55℃/1min→72℃/2min]
最后的elongationstep:72℃/10min
5)将微量离心管移至反应器上,并开始进行PCR反应。
6)反应完成后,以微量移液器吸出矿物油,并取出5μLPCR反应产物,进行洋菜胶体电泳分析。
PCR技术核酸探针核酸探针的制备方法
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明:本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容
版权声明:未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘在线”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。