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常用转染试剂成分对比分析
细胞转染是指将外源基因如DNA,RNA等导入细胞内的技术。随着分子生物学的发展,转染已经成为研究和控制细胞基因功能、实现基因调控的常规工具。市场上各种转染试剂琳琅满目,各有千秋,然而没有任何一种转染试剂可以能够适用于所有细胞种类、满足所有实验需求和目的,成分控认为转染试剂的成分及作用机理对转染效果及细胞生理作用影响显著,是转染试剂选择的重要依据,选试剂时要留意成分哦。
严格来讲,转染的方法可以基于化学法、物理法(电穿孔、显微注射等)以及病毒介导法,没有一种方法是放之四海而皆准。作为成分控的小编,本次主要为大家介绍基于各类转染试剂的化学法转染。
基于磷酸钙成分的转染试剂,其主要作用原理是与DNA通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA复合物,粘附到细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。pH值,钙离子浓度,DNA浓度,沉淀时间,细胞孵育时间乃至各组分加入顺序都可能对结果产生影响,因此实验条件摸索和优化时间较长,且重复性不佳。
基于阳离子聚合物的转染试剂,带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吞作用进入细胞。其又分为树枝状阳离子聚合物和线性阳离子聚合物两类,前者细胞毒性相对较大,后者细胞毒性较小,但其转染效率都高于脂质体转染,适用也较为广范。
以上单一成分的转染试剂或聚焦于提高效率或着重于降低细胞毒性,可谓鱼和熊掌不可兼得也。
新一代转染试剂,不局限于单一成分,混合了不同专利配方的脂类(非脂质体)、加上蛋白质组分、以及各种的专利成分,兼具了转染效率高和细胞毒性小的优势,且操作更加简单,易于高通量。
罗氏X-TremeGENE 便是新一代转染试剂的佼佼者,升级版的多组分混合试剂,兼具极高转染效率和极低细胞毒性,在超过350株真核细胞株中获得了高效转染的验证,尤其针对难转染细胞株亦有出色表现。
图1. 两种试剂对CHO-K1细胞转染带GFP标记的质粒,A和C是转染后荧光显微图,B和D是明场显微图.
与竞争产品比较,X-tremeGENEHP表现出更优的转染效率更低的细胞毒性
图2. 不同试剂在含血清的培养基中对四种很难转染的细胞株进行转染,
X-tremeGENEHP试剂远优于其他试剂
默克自2015年成为罗氏生化试剂的全球独家代理,并于2017年扩大代理协议,增加对KAPAPCR/qPCR产品及罗氏自有核酸提取、qPCR产品的代理。至今,Merck代理的Roche产品可以提供从细胞培养和功能分析、基因机理研究到蛋白机理研究的完整方案:
Roche明星产品线:
热销产品列表
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