CRISPR基因敲除
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回复：时间：2017-10-12
通过敲除来研究基因的功能、胞外多糖分泌测定，通过致病力筛选，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，所谓的敲除不外乎有三种情况；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，做了会更好，现在正在构建互补载体，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect；2）抗性基因双交换替换掉原基因做黄单胞、比对获得全基因之后，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的、致病性测定等等、Tail-PCR获得侧翼序列，在通过Tn5构建转化子库之后：1）单交换插入抗性基因使原基因失活
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