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前段时间用了一下振动切片机,感觉要想准确的切出海马切片不太容易。然后搜索了一下,发现国外用McIlwaintissuechopper这种切片机的人也挺多的,而国内很多都是用的振动切片机。先上两张图
McIlwaintissuechopper
这种切片机的特点是从上向下竖直切下来,每切一次,下面的盘子移动一点点
振动切片机
这种切片机是水平切,将脑组织用502粘在那个小台子上切
两种切片机,我个人的理解是,上面那种可能要更好一点,对于振动切片机,组织块用502粘在小台子上,如果组织块比较大,下面一点点组织浪费也不要紧。但是如果我想切海马,先把海马剥离出来,然后再粘贴在振动切片机上,这样就没办法切了,海马体是个细长的结构,粘上去基本上就全浪费了(我看到很多国内文献都是用的振动切片机,先分离出海马体,然后再切,不知道他们是怎么解决这个问题的,在我看来,1到2周的乳大鼠,分离出的海马体是非常小的,再用胶水粘在小台子上,那都没得切了,不要告诉我说少涂掉胶水,这也解决不了根本问题)但是如果我平放在上面的组织切片机上,从上向下切,这样就没事,可以切出很多切片,完全不会浪费,但还是有个问题,上面那种切片机,虽然每切一次,下面的盘子移动一点距离,但脑组织毕竟是非常柔软的,会不会因为太柔软而不能切的均匀?放在冰水混合物中冻硬一点能不能解决这个问题?
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回复:时间:2015-11-08
我们实验室是切脑片做电生理,是这样固定脑组织的:事先做好1%的琼脂凝胶,修正适当大小的方块用502粘在切片机的载物台上,取出脑组织修整好后,放在滤纸吸一下液体,用502粘在琼脂的后面(就是退刀的方向),脑组织要紧挨着凝胶,然后立即加入冰的ACSF。
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回复:时间:2015-11-03
我用以下配方配制人工脑脊液(见附表),效果不错,能保证脑片的活性,在红外干涉相差显微镜下能观察到神经元的良好形态。基本上能保证PH值的稳定。实际上脑片培养的好坏需要注意以下几点(个人的一点体会):ACSF的PH值,保证在7.4左右;取脑的速度,必须快,最少要在1min内完成;修整脑块的时间尽可能短;ACSF的温度(呈冰水混合状态最好);在孵育时,脑片不能重叠,并使其两面都能接触到ACSF。人工脑脊液配制.doc(32.5k)
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回复:时间:2015-11-07
GBSS:取3蒸水1000ml,称取CaCl20.17g;KCl0.37g;KH2PO40.03g;MgCl20.1g;MgSO40.03g;NaCl7.00g;NaHCO32.27g;NaH2PO4•12H2O0.3g;D-Glucose1.0g;依次溶于1000ml蒸馏水中。0.22μm孔径的微孔滤膜过滤除菌,4℃保存。新鲜组织是不需要固定的,只要放在一个类似于塑料膜的叫Aclar膜上,它自己可粘附在上面,连膜一起切,以组织断而膜不断为宜
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