生物素化造血干细胞抗原CD133抗体

编号：XY-0395R

修复液：0.01M枸橼酸（pH6.0）或者0.05MEDTA（pH8.0）

{一}抗体修复方法：

方法1：沸水浴修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态15min，自然冷却至室温；

方法2：微波修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷却至室温。

{二}抗体溶解方法：

方法1：我们的抗体（冻干粉）已经包含了0.01MPBS、1%BSA和0.1%防腐剂（叠氮钠或庆大霉素），您只需要加入灭菌的双蒸水就行了。抗体溶解后，置于-20℃保存，最好分装后使用，避免反复冻融，可保证至少1年有效；

方法2：也可以只加入一半体积的双蒸水，再用一半体积的甘油补足，置于-20℃保存，这样抗体不会冻，有利于抗体的稳定。

后续试验时，再使用对应的缓冲液稀释成工作液，即用即配。

我们的抗体（冻干粉），在常温放置下，至少一个月有效；若在-20℃下保存（推荐），至少三年有效。

{三}常用试剂的配制：

1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/LpH7.2PBS

试剂质量/容量NaH2PO4·2H2O0.39克Na2HPO41.27克NaCl0.85克NaN3200mgH2O（蒸馏水）至1000ml

2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液pH7.4，PBST

试剂质量/容量NaCl2.0克KH2PO40.2克Na2HPO4·12H2O2.9克KCl0.2克NaN30.2克H2O至1000ml吐温（Tween）200.5ml注：4°C保存备用

3、包被液（简称CB）pH9.6

试剂质量/容量Na2CO31.59克NaHCO32.93克NaN30.2克H2O至1000ml注：密封盖好，4°C存放备用

4、ELISA底物液（可溶性底物）

试剂质量/容量磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ml)24.3ml0.2mol/LNa2HPO4（28.4克/1000ml)25.7mlH2O50ml注：4°C存放备用

5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）

试剂质量/容量0.05mol/LpH7.6Tris-HCLTris6.05克HCL(36%)3.15克（约2.7ml浓HCL）H2O至1000ml注：DAB为3´，3´二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色

6、DAB溶液配制：（组化及Westernblot显色）

称DAB30mg，用0.05mol/LpH7.6Trs-HCL缓冲液100ml溶解，如有沉淀，过滤后使用，一般新鲜配制使用；

使用前加入1%H2O21ml至1.5ml，H2O2浓度为0.01%，混均后使用。

7、3′，3′，5′，5′，-四甲基联苯胺（TMB）溶液配制

用二甲基甲酰胺（dimethylformamide，DMF）或无水乙醇，将TMB配成1%浓度，4°C保存半年以内使用；

使用前，用pH5.0磷酸-柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml（1mg/TMB）1%TMB溶液中，再按每毫升TMB加入30%H2O21ul，混匀后立即使用。2NH2SO4终止后，450nm测定OD值。

8、1%离子琼脂胶配制液

作免疫双相扩散，单相扩散及免疫电泳中使用。

0.05UpH8.6巴比妥钠-HCL缓冲液。

试剂质量/容量巴比妥钠23.8克1mol/LHCL34.5mlH2O2150ml