一、材料

1.缓冲液和溶剂

溴酚蓝蔗糖溶液，乙醇，酚，Sephacryl平衡缓冲液，乙酸钠（3mol/L，pH5.2），含有浓度为20μg/mlRNaseA的TE（pH8.0）。

2.凝胶

0.7%琼脂糖，用TBE配制。

3.核酸和寡核苷酸

DNA样品，CsCl密度梯度离心纯化。

4.离心机和转子

SorvallSS-34转子或性能相同的其他转子

5.专用设备

填装Sephacryl树脂的层析柱，SephacrylS-1000凝胶过滤树脂（Pharmacia)

二、方法

1.准备一个1x10cm的SephacrylS-1000层析柱，用Sephacryl平衡缓冲液平衡。

2.测定质粒制备物体积。加入0.1倍体积的3mol/L乙酸钠（pH5.2)和2倍体积的乙醇，混匀，于4℃放置30min。

3.于4℃以大于10000g（相当于用Sorvallss-34转头9100r/min）离心15min回收核酸，尽可能去掉上清，打开管口，在工作台上放置几分钟，使最后残留的痕量乙醇蒸发殆尽。

4.用含有RNA酶Ⅰ的少量TE(pH8.0)(至多400μl）重新溶解潮湿的质粒DNA沉淀，RNA酶的终浓度至少为100μg/ml。

5.质粒DNA溶液于室温下温育1h。

6.用等体积的TE(pH8.0)平衡的苯酚抽提一次。

7.吸取上层水相溶液，加100μl溴酚蓝蔗糖溶液。将蓝色的一层溶液铺在SephacrylS-1000层析柱上。

8.将质粒DNA溶液装入层析柱，并用Sephacryl平衡缓冲液洗柱，立即开始0.5ml组分的分部收集。

9.当收集15个组分之后，用夹子夹住层析柱的底部，此时，蓝色的染料应刚好流经层析柱的一半。

10.从各收集的组分中各取10μl样品，用0.7%的琼脂糖电泳及溴化乙锭荧光染色来确定含有质粒DNA的组分。

11.将含有质粒DNA的组分合并在一起，加2倍体积的乙醇，于4℃沉淀10min。然后于4℃以大于10000g离心15min（相当于用SorvallSS-34转头9200r/min）回收DNA沉淀。

12.尽可能去掉上清，打开管口，在工作台上放置几分钟，使最后残留的痕量乙醇蒸发殆尽。

13.用TE(pH8.0)溶解潮湿的质粒DNA沉淀。