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总糖含量的测定实验一苯酚硫酸法
蚂蚁淘
/发布时间:1533580416 /浏览量:224
| 实验方法原理 | 苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糖醛酸在480nm）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 葡萄糖 试剂、试剂盒 | 浓硫酸苯酚 仪器、耗材 | 试管试管架移液管量筒烧杯离心管玻璃碾磨器离心机分光光度计
实验步骤 | 1.材料的处理:将0.5～1g所测的材料捣碎，用适量蒸馏水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提，混合液离心得抽提液即样品液。 2.标准曲线制作:取50μg/ml的己糖标准溶液0ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml于试管中，用水补足到0.5ml，加0.3ml5%酚溶液，混匀后快速加入1.8ml浓硫酸，振荡混匀，室温放置20 min即可出现橙黄色，以第一管调零点，可于490nm处比色测定读OD值。以糖含量为横坐标，相应的OD值为纵坐标，绘制标准曲线。 3.样品含量测定:取0.5ml内含2～25μg糖量，同样加入0.3ml5%酚溶液，混匀后立刻沿管壁加入浓硫酸1.8 ml，振荡混匀，达室温后，可测490nm处的OD值，从标准曲线上查相应糖含量。 注意事项 | 1.几种己糖测定方法中所使用的显色剂，如蒽酮、间苯二酚等，都需要沸水浴加热，而本法不需要，且蛋白质的存在对本法的显色反应影响不大，故也可用于糖蛋白中的己糖测定。除此之外，还可用于己糖甲基化衍生物和6－脱氧核糖、戊糖的测定。 2.本法的热量来自浓硫酸与水的混合，因此加浓硫酸时反应快，且立即混匀，试管应大一些，以免烫手。
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