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我问了两个实验员,一个说可以,一个说不行。
说不行的理由:1:会把RNA和DNA打断。2:超声破碎过程中会产热,会降解RNA。
请问有人用过破碎仪提取总RNA或基因组DNA吗?如果能,请问电压调到多少?还有哪些要求。
另外关于破碎仪消毒的问题,能用酒精棉球擦拭,再用无菌棉片檫干,再放入trizol中超声破碎吗?还有没有更好的方法?
谢谢!
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回复:时间:2010-09-15
能!我和同学提取肝脏组织的蛋白和RNA都是用的超声细胞破碎仪,注意放在冰上操作,组织粉碎即可,具体电压不记得了。用酒精棉球擦拭,再用无菌棉片檫干消毒后,再放入trizol中超声破碎,然后按提取步骤操作就行了。提取出来的RNA沉淀还是很多的,后续的结果也可以,可以试试。
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回复:时间:2010-09-17
不推荐使用,确实存在问题1:会把RNA和DNA打断。2:超声破碎过程中会产热,会降解RNA。如果构建CDNA文库一定不要使用,但是普通的rt可以使用肝脏的酶活性很强,推荐使用液氮研磨
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回复:时间:2010-09-24
也没有什么电压和时间吧,那个东西,打的时间长一点点,头就特别的热,所以一般都是在磨的过程中备一瓶带冰的NS,一般都是十五秒一停,然后就放入带冰的NS中降一下温,电压好像总有两三档来着,能打碎就OK。如果是DNA还行,RNA还是像楼上推荐的液氮研磨。
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回复:时间:2010-09-19
songtion不推荐使用,确实存在问题1:会把RNA和DNA打断。2:超声破碎过程中会产热,会降解RNA。如果构建CDNA文库一定不要使用,但是普通的rt可以使用肝脏的酶活性很强,推荐使用液氮研磨如果是培养的肝细胞可以用液氮研磨吗,因为加trizol之后感觉裂解不完全,如果加了trizol怎么用液氮研磨呢?
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