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我现在正在做放射受体分析实验:提取大鼠皮层和海马膜蛋白后,用3H标记的放射性配体与之结合,测定放射性计数,做出受体饱和曲线,求KD和BMAX来测量受体功能。
有几个问题想问问大家:
1.我看到相当多文献中,结束反应用的是抽滤,由于条件的限制,我们这里没有该装置,所以就取了少数文献中的方法,用12000G离心10min结束反应,然后沉淀TRIS-HCL洗涤3次。测量时在沉淀所在的EP管中加入闪烁液(该闪烁液的配方适用于样品含水量较少的情况),每管1ML。请问大家,这样结束反应行吗?沉淀是否应该烘干?
2.我用的液闪仪计数不是很稳定,如果进行校正,尤其是读数比较小的时候(如只有数百),以减少误差?
3.加入闪烁液后,是否应该避光放置一段时间后再测量?
谢谢!
有几个问题想问问大家:
1.我看到相当多文献中,结束反应用的是抽滤,由于条件的限制,我们这里没有该装置,所以就取了少数文献中的方法,用12000G离心10min结束反应,然后沉淀TRIS-HCL洗涤3次。测量时在沉淀所在的EP管中加入闪烁液(该闪烁液的配方适用于样品含水量较少的情况),每管1ML。请问大家,这样结束反应行吗?沉淀是否应该烘干?
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