cDNA文库构建

定义：含一种生物体所有基因编码的cDNA分子的克隆群。以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。

一般实验过程：

1：反转录酶催化合成cDNA第一链

2：cDNA第二链的合成

3：cDNA的甲基化

4：接头或衔接子的连接

5：SepharoseCL-4B凝胶过滤法分离cDNA

6：cDNA与λ噬菌体臂的连接

注意事项：

1.RNA的提取（例如异硫氰酸胍法，盐酸胍—有机溶剂法，热酚法等等，提取方法的选择主要根据不同的样品而定）。

2.要构建一个高质量的cDNA文库，获得高质量的mRNA是至关重要的，所以处理mRNA样品时必须仔细小心。

3.由于RNA酶存在所有的生物中，并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境，因此建立一个无RNA酶的环境对于制备优质RNA很重要。

4.文库构建要选择合适的载体，常规用的是λ噬菌体，这是因为λDNA两端具有由12个核苷酸的粘性末端，可用来构建柯斯质粒，这种质粒能容纳大片段的外源DNA。

5.胶回收前电泳槽，电泳板，梳子等都要用1%的HCl浸泡过夜。
 
6.胶回收时电压要稳定。