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Cycle Sequence Reactions For Large Insert Plasmid Templates
蚂蚁淘
/发布时间:1545759213 /浏览量:43
Thefollowingdye-labeledterminatorreactionchemistrieshavebeendesignedtobalanceconservationofreagentswiththeresultingsequenceproductsignalstrength.WhencoupledwithBACPACResourcetemplatepreparation,N-freereadlengthsof>400ntscanbeexpected.Moreemphasiscanbeplacedonreagentconservationbyfurthervolumereductionordilution;oronsequenceproductsignalstrengthbyincreasingthereactionsize. CycleSequenceChemistryConditions: CycleSequenceConditions: 1)Initialdenaturationstep:96oC4min.2)denaturation:96oC10sec.3)annealing:50oC10sec.4)extension:60oC4min.runsteps2-4for100cycles.5)hold:4-10oC. PrimersUsefulForBACandPACVectors: T7.29:5’gccgctAATacgactcactatagggagag29merT7:5’taatacgactcactataggg20mergSP6:5’gttttttgcgatctgccgtttc22mer 3StockABIReadyReactionmixesaresupplementedwith4mMMgCl24ReferstoABI1x(20ul)reaction5Annealingtempcanbeadjusted,basedonTmofprimersused
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