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抗生素检定培养基8号
抗生素检定培养基8号(AntibioticAgarNo.8)
用 途:用于去甲万古霉等效价及残留的微生物学检定(中华人民共和国药典2005版)。
原 理:本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用,抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性有关;比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,以测定供试品效价的一种微生物学方法。
配方(每升):
酵母膏粉 | |
硫酸铵 | |
葡萄糖 | |
琼脂 | |
1000mL |
最终pH6.0±0.1
使用方法(计数用法):
1、称取本品
2、双碟的制备应在无菌室或洁净室内进行,并注意避免微生物及抗生素污染。培养基应在水浴中或微波炉内融化,避免直火加热。
3、双碟的底层:用灭菌大口20mL吸管或其它灭菌分装器,吸取已融化的培养基20mL注入双碟内,待凝固后加入菌层。(双碟内的培养基应均匀的分布于平皿内。)
4、菌层:取出试验用菌悬液,按预试好的加菌量[能得清晰的抑菌圈位度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18~
5、放置钢管:使用钢管放置器或小眼科镊子,使钢管平稳的落在培养基上,相应剂量的钢管对角均匀放置。钢管放妥后,双碟静置5~10分钟后,再开始滴加抗生素溶液。
6、c滴加抗生素溶液用灭菌毛细滴管或微量加样器(调节加样量约为200-300μL),在滴加之前用溶液洗2~3次。滴加标准品及供试品溶液顺序,因实验设计方法不同而异。(2.2)法,在双碟的4个钢管中分别成“Z”字形滴加标准品及供试品高、低两种浓度的溶液;在(3.3)法的6个钢管中间隔3个钢管中分别滴加标准品及供试品高、中、低3种浓度,并使相同浓度成对角。滴加溶液至钢管口平满。注意滴加时间溶液的间隔不可过长。
7、滴加完毕,用陶瓦盖覆盖双碟,平稳置于双碟托盘内,双碟叠放不可超过3层,将双碟托盘水平平稳地移入培养箱中间位置,在35~
8、抑菌圈测量:测量前应检查抑菌圈是否圆整,如有破圈或圈不圆整,应舍弃该碟。可用抑菌圈测量仪或游标卡尺测量。
质量控制:本品在灭菌后应澄清无沉淀,下列菌株接种后35~
菌 名 菌 号 抗生素 检测效果 |
枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 去甲万古霉素 抗生素剂量的对数值与抑菌圈直径呈线性相关 |
贮 存:贮存于避光、阴凉干燥处,用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。
规 格:
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