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最近与战友们探讨原液冻存的问题,各家做的五花八门,做法各不相同。
有的-20度冻存的(有的项目有问题,有的没问题)、有-35度冻存的,有-60度冻存的,有-80度冻存的。
冻存的因素:冻存温度,这个文献等于没说(依据是啥,@fjj8802战友说低于玻璃化转变温度,是否还有别的考虑)、冷冻速率(快,快到什么程度),冻时间(完全冻上,这个貌似需要估计吧,尤其是大量的,如何靠小模型能看出来)、融化温度、融化速率(搅拌)、规模(这个还真不好靠模型来评估)。评估如何来评估冻存的质量好坏,有人说冻融循环,这个小模型适合看蛋白是否对冻融敏感,但是不能很快知道这个蛋白长期冻存的稳定问题。
开本帖探讨原液冻存的注意事项及依据,战友们也可以谈谈自己家目前的做法。
链接:
//d.dxy.cn/detail/12769151
回复:【求助】蛋白制剂处方筛选及稳定性研究参考书,求电子的-蚂蚁淘论坛
CurrentPerspectivesonStABIlityofProteinDrugProductsduringFormulation,FillandFinishOperations.pdf(235.33k)
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回复:时间:2017-04-29
我说下自己的经历,不一定对!之前在一家诊断试剂公司开发诊断用抗体!我们那边发现有的抗体冻在-20冻存二年甚至以上,抗体的结合活性都没有变化,也没有降解。有的抗体半年就会发生降解,结合活性也会下降。这些降解的抗体放在-80又不会降解!我们怀疑是抗体的共晶点不同导致的。当然诊断用抗体的缓冲液有特殊要求,不同于治疗性抗体,没有治疗性抗体稳定。至于冻存快慢这个问题我们没有去研究。期待高手分享!
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回复:时间:2017-04-25
贴一篇BioPharmInternational的文章,生产规模的原液冻融速率研究。用的是-80℃,结论是慢冻速融最佳。http://www.biopharminternational.com/impact-manufacturing-scale-freeze-thaw-conditions-mab-solution其实到了大规模是要做这样的事情的,赛多利斯也给我推过研究原液冻融速率的设备。目前我们前期小批量研究,做冻融挑战实验控制冻融速率有两种搞法:①用冻干机设温度程序②用细胞冻存盒冻融也能慢点。
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回复:时间:2017-04-24
多谢版主开这个topic,最近也在写一些关于单抗原液的冻存策略总结,目前市场上的单抗药原液保存确实是五花八门,可能需要大家来共同探讨一下更深层次的理论知识,先放一些理论资料供大家参考。Freezingandthawingofproteinsolutions.pdf(382.73k)
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回复:时间:2017-04-24
Thermo也有专门的原液冻存设备,据说一整套上千万。不过就我自己接触的项目来说,像大家所说,各种冻存方式都有;但个人认为以稳定性考察结果制定原液保存方式:一:使用缩小模型(但保证原液冻存材料要一致);二、考察时间一般至少6个月;三、多个温度同时考察(跨度大一点,最高温度4℃);四、至少要选用能识别降解、聚体、电荷异质性的纯度、活性检测指标;五、最后根据稳定性结果选择合适的保存温度。有特殊的例子要做的实验肯定会更多。以上仅为个人观点,有不足的地方请指正。
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