kamiyabiomedicalKT-12247说明书
Rat Creatine Kinase MB Isoenzyme (CKMB) ELISA
大鼠肌酸激酶同工酶（CKMB）ELISA货号：KT-12247
预期用途该试剂盒是一种用于大鼠CKMB体外定量测定的夹心酶免疫分析方法血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体。为了仅供研究使用。
COMPONENTS
Reagents Quantity
Pre-coated, ready to use 96-well strip plate 1
Calibrator 2
Calibrator Diluent 1 20 mL
Detection Reagent A 1 120 L
Detection Reagent B 1 120 L
Assay Diluent A 1 12 mL
Assay Diluent B 1 12 mL
TMB Substrate 1 9 mL
Stop Solution 1 6 mL
Wash Buffer (30X concentrate) 1 20 mL
Plate sealer for 96 wells 4
需要但未提供的材料一。带450 10纳米滤光片的微孔板阅读器。2。单通道或多通道移液管，具有高精度和一次性尖端。3。微离心管。4。去离子水或蒸馏水。5。吸墨纸吸墨纸吸墨纸。6。洗涤液容器。7。0.01 mol/L（或1x）磷酸盐缓冲盐（PBS），pH值7.0-7.2。
储存所有试剂应按小瓶上的标签保存。校准器，检测试剂A，检测试剂B和96孔板条板在收到后应存放在-20℃下，其他试剂应存放在-20℃下应为4 C。未使用的板条应保存在密封袋中，并提供干燥剂尽量减少暴露在潮湿空气中。打开的测试包将保持稳定1个月，前提是它存储为如上所述。
试验原理本试剂盒中提供的微孔板已预涂有CKMB特异性抗体。然后将校准品或样品添加到适当的微孔板上，微孔板上有一种针对CKMB的生物素结合抗体。接着，将亲和素与辣根过氧化物酶（HRP）结合后，加入到每个微孔板中并孵育。加入TMB底物溶液后，只有含有CKMB、生物素结合抗体和酶结合亲和素的微孔才会出现颜色变化。加入硫酸溶液终止酶-底物反应，并测量颜色变化在450 nm 10 nm波长下进行分光光度测定。然后通过比较样品的外径和校准曲线来确定样品中CKMB的浓度。样品收集和储存血清使用血清分离管，使样品在室温下凝结2小时，或在4℃下凝结过夜，然后在约1000 g的条件下离心20分钟。立即对新制备的血清进行分析，或在-20℃或-80℃下将样品分批储存，以备日后使用。避免反复冻融循环。
等离子体用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血浆。在收集后30分钟内，将样品在1000 x g、4 C下离心15分钟。立即取出血浆并进行分析，或在-20 C或-80 C下将样品分批储存，以备日后使用。避免重复冻融循环。组织匀浆组织匀浆的制备取决于组织类型。一。组织在冰冻PBS中冲洗以彻底去除多余的血液，并在均质前称重。2。将组织切成小块，在新鲜的裂解缓冲液（根据目标蛋白的亚细胞位置需要选择不同的裂解缓冲液）（w:v=1:20-1:50，例如在20-50毫克的组织样品中加入1毫升裂解缓冲液）中用玻璃均质机在冰上均质（微型组织研磨机也可以）。三。所得悬浮液用超声波细胞破胶剂进行超声处理，直到溶液澄清。四。然后，将匀浆在10000 g下离心5分钟，收集上清液，立即或等分测定，并在 -20℃下保存。细胞裂解物在按照以下说明进行分析之前，需要对细胞进行裂解。一。贴壁细胞用冷PBS轻轻洗涤，用胰蛋白酶分离，1000 g离心5分钟（悬浮细胞可直接离心收集）。2。在冷PBS中清洗细胞三次。三。在浓度为107个/mL的新鲜溶解缓冲液中重新培养细胞，如有必要，可对细胞进行超声波处理，直至溶液澄清。四。在1500 x g下，在4 C下离心10分钟，以去除细胞碎片。立即测定或等分，并储存在 -20 C下。细胞培养上清液和其他生物液体在1000 x g下离心样品20分钟。收集上清液并立即进行分析，或在-20 C或-80 C下分批储存样品以备日后使用。避免重复冻融循环。
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