返回重点引文优化的通用发夹引物系统，用于基于 RT-qPCR 的 miRNA 表达定量分析相关页面 RNA 研究解决方案 PCR 和 DNA 扩增用于 qPCR 的荧光染料和预混液，采用 Biotium 的 EvaGreen® DyeForget-Me-Not™ qPCR 预混液高性能、低- EvaGreen® 和探针 qPCREvaGreen® DyeNext-gen DNA 染料用于 qPCR、HRM 等的成本预混液DNA 和 RNA 定量试剂盒通过酶标仪或 Qubit® qPCR 预混液对 DNA 和 RNA 样本进行精确定量分享文章与同事分享这篇文章。复制链接发送EmailMicroRNA (miRNA) 是在植物、动物和一些病毒中发现的单链非编码 RNA 分子（包含≈22 个核苷酸）。除了探索 miRNA 的进化史和细胞功能外，研究人员还在研究 miRNA 失调的临床意义。血液和脑脊液中的循环 miRNA 也存在有潜力作为多种疾病的生物标志物。逆转录定量 PCR (RT-qPCR) 分析是目前最流行的 miRNA 水平定量方法。然而，基于 qPCR 的 miRNA 检测存在两个主要的技术挑战：miRNA 的长度短和 miRNA 家族中存在的高度保守序列。使用茎环或发夹引物进行 miRNA RT 反应有助于克服这些挑战（图 1A）。然而，发夹引物系统需要使用 miRNA 特异性发夹引物 (MsHPs)，这不符合成本效益或不利于高通量。在最近的一篇核酸研究文章中，He 等人。报道了一种新型通用发夹引物 (UHP) 系统的开发，该系统允许基于 RT-qPCR 的 miRNA 定量而不需要 MsHP。使用四个具有相同发夹结构但在其 3\' 末端分别锚定有两个、三个、四个和六个简并核苷酸的 UHP（图 1B；UHP2、UHP3、UHP4 和 UHP6)，该小组分析了基于 UHP 与基于 MsHP 的 RT-qPCR 的准确性。使用 Biotium 的 Forget-Me-Not™ EvaGreen qPCR Master Mix 建立了构成其分析核心的触地式 qPCR 反应。他们以一组 14 种 miRNA 为目标，并使用来自几种常研究的人类细胞系的材料，发现 UHP 产生了稳健的 RT 产物，并以足够的效率量化了 miRNA。 UHP4 被证明是\"成功的”通用引物，显示出与 MsHP 相当的准确性。在存在核糖体 RNA 和长转录物污染的情况下，UHP4 也显示出与 MsHP 一样的性能。在进一步的实验中，作者根据经验确定了一种优化的 UHP (OUHP) 混合物，该混合物与基于 MsHP 的 miRNA 量化能力密切相关。随着进一步的发展，包括对多重分析的潜在适应，UHP 系统可以克服使用 MsHPs 进行 RT 反应的必要性，并使这些分析更具成本效益并适合高通量研究。图 1. UHP 系统的图形表示。 (A) MsHP 包含与成熟 miRNA 的 3\' 端互补的六个核苷酸，随后是茎环结构。一旦 MsHP 与目标 miRNA 退火 (a)，便会进行 RT 反应 (b)。然后将所得产物用作 RT-qPCR (c) 的模板，使用对成熟 miRNA 的 5\' 端特异的正向引物和与发夹的 3\' 端互补的反向引物。 (B) 测试的 UHP 的结构和核苷酸序列。 \"MsHP”是一个代表性的 MsHP，它包含一个 14-bp 的茎、16-nt 的环和与成熟 miRNA 的 3\'-末端互补的六个核苷酸（表示为\"x”）。 UHP2、UHP3、UHP4 和 UHP6 说明了本研究中测试的四种 UHP。它们与 MsHP 共享相同的发夹序列，只是它们在茎的 3\' 端包含两个、三个、四个和六个随机核苷酸。进一步的经验iments（数据未显示）确定了一种优化的 UHP 混合物，其摩尔组成为 UHP2:UHP4:UHP6 = 8:1:1，在 miRNA 定量中密切概括了 MsHP。学分：他等。 https://doi.org/10.1093/nar/gkab1153 根据知识共享许可复制。详细了解 Biotium 可靠的 RNA 研究解决方案和 PCR 试剂选项，包括：EvaGreen® Dye、Forget-Me-Not™ qPCR Master Mix 和产品使用 Qubit® 荧光计或兼容的酶标仪对核酸进行超精确定量。完整引用 He, F., Ni, N., Wang, H., et al. OUHP：一种优化的通用发夹引物系统，用于经济高效且基于高通量 RT-qPCR 的 microRNA (miRNA) 表达定量。核酸研究，50(4)，e22-e22 (2022)。 https://doi.org/10.1093/nar/gkab1153Qubit 是 Thermo Fisher Scientific 的注册商标。

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