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目录号：IQ545

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数据表主要描述：小鼠抗 EAPP [1E4] 目标抗原：EAPP 目录编号：IQ545 数量：0.1mg 浓度：1mg/ml 克隆：1E4Host：MouseIsotype：IgG1Myeloma/Fusion Partners：X63-Ag8 .653免疫原：人 EAPP 的 N 端片段（免疫原序列：1-266）物种反应性：人类、小鼠纯化：蛋白 G 格式：含有 PBS + 0.1% 叠氮化钠的纯化抗体（来自上清液）应用：WB、IP、ICC/IF稀释度：最佳抗体稀释度应通过滴定确定，但作为指南，蛋白质印迹可尝试高达 1:200 也称为：E2F 相关磷蛋白抗体； E2F 1 抗体;E2F 转录因子 1 抗体;E2F-1 抗体;E2F1 抗体;E2f1 E2F 转录因子 1 抗体;E2F1_HUMAN 抗体;KIAA4009 抗体;mKIAA4009 抗体; Entrez Gene ID(s)：55837、66266 引文引文：

Novy 等人，MBC 卷。 16, Issue 5, 2182-2190 PUBMED

ProtocolsImmunofluorescence protocol - Formaldehyde fixationCollect cells from T.c.unit and remove media from petri dish using suction.Wash with 1x PBS and remove.Incubate cells in pre-warm (37°C) 帕拉-在轨道摇床上在室温下用甲醛处理 12 分钟。去除 PFA 并在 1x PBS 中的 0.5% Triton X-100 中在室温下孵育 5 分钟。准备封闭试剂，这也是抗体稀释剂。用 1x 洗涤细胞 2x室温下的 PBS，4 分钟/在定轨摇床上洗涤。在室温下用 1% NCS 和 1x PBS 封闭 30 分钟。准备一抗（50 升/盖玻片）和湿染色室。用 1x 洗涤细胞 2 次PBS 在室温下短暂风干。在染色 ch 中与一抗在室温下避光孵育 1 小时琥珀色。在此期间准备二抗。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次（更换烧杯 5 次/每个烧杯计数 5 次）在染色室中于室温下在黑暗中用二抗孵育 1 小时。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次。Mount在 Dapi 中。

溶液（在染色当天新鲜制备）。

* 1x 磷酸盐缓冲盐水。*封闭试剂：1% NCS 溶于 1x PBS（使用新鲜的 10x PBS）。*固定溶液：3.5%多聚甲醛。

1.75g PFA 溶于 20ml d.H2O 加 5 滴 1M NaOH。在 50-60°C 的热板上搅拌直至溶解。添加 4 滴 IN HCI 并检查 pH 指示剂条。 PH 应为 7.4。用 d.H2O 完成体积至 25ml，并加入 25ml 2xPBS。在添加到盖玻片之前检查 pH 值。

免疫荧光协议 - 甲醇/丙酮固定从 T.C.unit 收集细胞并使用抽吸从培养皿中去除培养基。用 1x PBS 清洗并取出。用冷甲醇：丙酮 1：1 冰上固定细胞 10 分钟。准备封闭试剂，这也是a的稀释剂抗体。去除固定剂并在室温下用 1x PBS 洗涤细胞 3 次，每次 4 分钟/在轨道摇床上洗涤。在室温下用 1% NCS 和 1x PBS 封闭 30 分钟。准备一抗（50 升/盖玻片）和潮湿的染色室。在室温下用 1 x PBS 清洗细胞 2 次，然后风干约 7 分钟。在染色室的黑暗中室温下与一抗孵育 1 小时。在此期间准备二抗。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次（更换 5 次烧杯/每个烧杯计数 5 次）在染色室的黑暗中，在室温下用二抗孵育 1 小时。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次。在 Dapi 中安装。

溶液（在染色当天新鲜制备）

* 1x 磷酸盐缓冲盐水。*封闭剂：1% NCS 溶于 1x PBS（使用新鲜的 10x PBS） .* 固定液：甲醇：丙酮 1:1 冰冷sh 缓冲液加一抗一小时用洗涤缓冲液洗涤 6 X 5 分钟在洗涤缓冲液加二抗中孵育一小时用洗涤缓冲液洗涤 6X 5 分钟检测（例如 ECL，Amersham 根据制造商的说明）洗涤缓冲液

PBS + 0.1% Tween 20

Blocking buffer

Wash buffer + 5% dried milk powder

使用的抗体浓度取决于每种抗体、抗原的量和使用的检测方法。一般稀释度在几百倍到几千倍稀释之间，但通常要凭经验确定。

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