逆转录(reverse transcription)是将RNA转化为cDNA来进行qPCR或构建cDNA文库的关键步骤,而所获得的cDNA的质量直接影响后续实验结果的好坏。
逆转录过程主要由逆转录酶(Reverse Transcriptase)来帮助实现,通常情况下逆转录酶都 身兼数职 :
RevertAidReverse Transcriptase(基本款)作为RevertAid系列的基本款,RevertAid逆转录酶具有RNA指导的DNA聚合酶活性、DNA指导的DNA聚合酶活性以及RNaseH活性。
RevertAidReverse Transcriptase活性的最适温度是42 C。其生产的cDNA可以用于:
RevertAid H Minus Reverse Transcriptase(特别款)与RevertAidReverse Transcriptase相比,HMinus Reverse Transcriptase的最大特点是不备RNaseH活性,也就意味着它不会水解在第一轮cDNA复制时的所用的RNA模版,因此可以避免RNA在单链DNA合成过程中就被水解,从而保证从较长RNA模版产出的单链cDNA的完整性(长至13kb)。
此外H Minus Reverse Transcriptase还可以在一个较宽的温度范围内保持最佳活性(42至45 C)。
RevertAid Premium Reverse Transcriptase(升级款)和RevertAid H Minus Reverse Transcriptase一样,RevertAid Premium Reverse Transcriptase也不具备RNaseH活性,并且经过升级的PremiumReverse Transcriptase在其他方面具有更强劲的表现。
首先,Premium Reverse Transcriptase可以产出更长的cDNA(长至20kb);其次,由于PremiumReverse Transcriptase良好的热稳定性,反应体系最高可以升到60 C来破坏RNA的二级结构,从而获得质量更高的cDNA;
另外,Premium Reverse Transcriptase有着更高的合成速率,可以在三十分钟内完成cDNA合成。
RevertAid H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(精品套装)两种RevertAid Kit除了提供相应的逆转录酶外,还提供整个cDNA合成所需要的各种试剂,包括:
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