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AZscript™ 逆转录酶

AZscript 逆转录酶 (RT) 是一种 RNA 依赖性 DNA 聚合酶，用于从 DNA 合成互补 DNA (cDNA) RNA 模板。 AZscript RT 源自莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV)，经过精心设计，可提高热稳定性并降低 RNase H 活性。在cDNA合成中，较高的反应温度可以减少RNA二级结构并提高反应的效率和特异性。此外，RNase H 活性的降低可提高 cDNA 合成的性能，特别是对于较长的转录本。

提高热稳定性RNase H 活性降低AZscript逆转录酶在 RT-qPCR 中表现出出色的性能和灵敏度

图 1. AZscript 在 RT-qPCR 中显示出出色的性能和灵敏度。根据制造商的说明，将系列稀释的 MS2 Armored RNA（Asuragen，52000）热裂解（75℃，5 分钟）并用作使用基因特异性引物合成 cDNA 的模板。使用 TaqPath™ qPCR Master Mix, CG 在 25 μl 反应中扩增相当于 2 μl cDNA 的体积。数据显示了对应于 100 000 至 10 个 RNA 拷贝的稀释系列的扩增图 (A) 和标准曲线 (B)，一式三份测量。

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图 2. 与常见的 AZscript 相比，AZscript 显示出相同或更好的性能使用逆转录酶。根据制造商的说明（ArcticZymes 和供应商 A），将系列稀释的 MS2 Armored RNA（Asuragen，52000）热裂解（75℃，5 分钟）并用作使用基因特异性引物合成 cDNA 的模板。使用 TaqPath™ qPCR Master Mix, CG 在 20 μl 反应中扩增相当于 2 μl cDNA 的体积。数据显示稀释系列的平均定量周期 (Cq)，对应于 100 000 至 10 个 RNA 拷贝，一式三份测量。误差线代表标准偏差 (n=3)。 *来自供应商 A 的逆转录酶未能检测到 10 个拷贝（Cq 设置为40).

特性

来源：在大肠杆菌中重组产生

大小：79.5 kDa

单位定义：1 个单位定义为所需酶的量使用 Poly(A)⋅oligo(dT)15 作为模板引物，在 37°C 下 10 分钟内将 1 nmol dTTP 掺入酸可沉淀材料中。该酶在 37.5 mM Tris-HCl pH 8.3 @ 25°C、40 mM KCl、6 mM MgCl2、0.75 mg/ml Poly(A)、0.03 mMoligo(dT)15、10 mM DTT、0.5 mM dTTP、 0.025 mCi/ml 3H-dTTP、0.1 mg/ml BSA、0.02% Triton X-100。

最佳温度 (>80%)：38-47°C

灭活： 70°C，15 分钟

建议的 5X 反应缓冲液：250 mM Tris-HCl pH 8.3 (25°C)、375 mM KCl、15 mM MgCl2

储存和稳定性：酶在提供的储存缓冲液中可在 -20°C 下稳定长达 9 个月。处理时将 ​​AZscript RT 置于冰上。有关稳定性的更多数据可根据要求提供。

质量控制

ArcticZymes 致力于我们产品的质量。 AZ脚本RT 是在我们位于挪威的 ISO 13485 认证工厂生产的。

dsDNA 核酸内切酶活性200 U AZscript RT 与超螺旋质粒 (1 µg) 在 37°C 下孵育 4 小时。琼脂糖凝胶电泳未显示闭合环状 DNA 向带切口 DNA 的任何转化。ssDNA 核酸内切酶活性200 U AZscript RT 与 M13 ssDNA (0.5 µg) 在 37°C 下孵育 4 小时。琼脂糖凝胶电泳未显示任何 ssDNA 降解的明显迹象。 ssDNA 和 dsDNA 核酸外切酶活性 200 U AZscript RT 与 3H-dATP 标记的 ds 或 ssDNA（0.5 µg，500 bp）在 37°C 下孵育 4 小时。对于任一底物，标记 DNA 的酸溶性放射性均未显着超过空白测试。

RNase 活性200 U AZscript RT 与 2 kb RNA 转录物 (1 µg) 在 37°C 下孵育 4 小时。琼脂糖凝胶电泳没有显示任何明显的 RNA 降解迹象。

其他数据和信息

我们我们很高兴根据要求提供与 AZscript RT 相关的其他数据。

我们感谢有关产品修改的建议。

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