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《快速生产CAR-T细胞新方案》
G-REX是美国Wilson Wolf Manufacturing 为T细胞免疫疗法研发的一款用于T细胞培养的装置 克服了目前T细胞免疫治疗大规模应用的障碍。G-REX培养瓶通过底透气膜使O2和CO2得到充分交换 一次性加入大量培养基可支持细胞培养长时间不换液 减少换液频率 减少操作 并且细胞培养过程中不需要摇晃 在普通的CO2培养箱中静止培养即可。目前已被证实在培养 CTL TIL NK Vg9Vd2 T cells 调节性T细胞 病毒特异性T细胞。
目前 T细胞转导基因是细胞治疗流程的障碍之一。普遍的细胞转导步骤是将激活的T细胞在涂有RetroNectin的袋子或板上进行病毒转导 在这个过程中其中要先预处理涂有RetroNectin的袋子或板子 然后才能进行转导。转导后还要更换新的培养容器。这种方法虽然转导效率相对比较好 但步骤繁琐 花费时间长 而且不符合封闭操作。
G-REX培养瓶不能包被RetroNectin 所以导致细胞转导无法在G-REX瓶子中完成。
Vectofusin-1 (MiltenyiBiotec Inc., Auburn, CA, USA)是一种合成肽 当加入到病毒和细胞的溶液中时 可以增强病毒转导。Vectofusin-1形成a-螺旋状纳米纤维 与病毒颗粒结合增强病毒-细胞相互作用。
在这里 我们分享一种简单的方法 用于在悬浮液中转导T细胞 并且作者展示了新的转导步骤 集成到一个流线型的制造过程 而整个过程仅仅依赖于一个单一的G-Rex生物反应器。 Christine Gagliardi, Mariam Khall Aaron E Foster, Streamlined production of genetically modified T cells with activation, transduction and expansion in closed-system G-Rex bioreactors,Cytotherapy,2019;21:1246-1257
首先 作者对传统的转导病毒培养模式和G-REX培养模式做了流程的对比
基于培养袋和G-REX的流程
可以看出 用G-REX和Vectofusin-1 可以简化步骤 使得使细胞激活 转导 扩增 收获都在同一个G-REX瓶子中完成。
G-REX培养实验步骤如下
在封闭系统G-REX100M-CS中
Day 0 PBMC在40ML培养基中复苏 激活
Day 2 转导 将Vectofusin-1和病毒液加到G-REX100M-CS中
Day 3 培养基加到最大体积 1L
之后每天取上清液 检测葡萄糖浓度和乳酸盐浓度。每三天添加一次细胞因子。
Day11 收获细胞 GatheRex
作者对两种培养模式下的细胞数目做了对比 可以看到细胞数在第14天左右达到最大 而且在相同接种数下 培养袋和G-REX培养的细胞数目几乎没有差别。
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细胞数对比
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扩增倍数对比
培养同样天数的情况下 需要操作的时间对比。
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时间对比
可以明显看出G-REX培养在操作的时间上比传统操作节省75%的时间。
同时 也对整个实验流程所用到的实验耗材做了价格上的对比 可以看出用G-REX培养节省了38%的费用。
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价格对比
当然 作者还对两种培养方式下 收获的T细胞的表型和功能进行分析 实验数据表面并无差异 详情见文章。
本篇文章介绍了在G-REX瓶子中完成T细胞激活、转导、扩增、收获等步骤 虽然转导效率比传统转导方式略低 但在操作时间 费用等方面节省很多 而且消除了细胞在激活和转导之间的清洗和转移 降低了操作步骤 减少了污染的风险。而且也附和我国颁布的《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则 试行 》中 提出的细胞治疗研究者应不断优化制备工艺 减少物理、化学或生物学作用对细胞的特性产生非预期的影响 尽量达到自动化、全封闭的生产的标准。微信搜索“泽平科技”可咨询更多技术详情
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