只争朝夕：如何节省免疫分析实验的时间 |蛋白质科技集团-蚂蚁淘在线

由于当前 COVID-19 大流行的情况，世界各地的许多研究人员都面临着实验室时间和资源的限制。当我们适应这些变化时，我们面临着寻找节省时间而不影响结果的方法的压力。 Proteintech 和 ChromoTek 提供的解决方案可帮助您节省当前免疫分析方案的时间，帮助您快速可靠地获得具有发表价值的结果。

免疫沉淀 (IP)

IP 实验很漫长。首先将样品与目标抗体一起孵育 1 小时至过夜。然后，与 Protein A/G 珠一起孵育 1-2 小时，通过离心或磁力方法沉淀蛋白质。拉通常，从免疫沉淀到洗脱目标蛋白大约需要1小时。总之，典型的 IP 可能需要 3 到 15 小时。

等待结果的时间可能太长。 ChromoTek® 开发了一系列用于标记融合蛋白的抗体珠缀合物，可在 2 小时内分离蛋白质。这些抗体是来自羊驼的高亲和力重组 VHH 片段，称为纳米抗体，具有更快的结合率。因此，与样品一起孵育只需不到 1 小时即可捕获总蛋白。由于纳米抗体已与珠子预先缀合，因此无需第二次孵育，并且随后即可对蛋白质进行分析。这些功能使得协议从开始到结束的持续时间不到 2 小时（图 1）。了解有关我们 Nano-Trap 试剂的更多信息。

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图 1. 免疫实验持续时间比较使用 GFP-Trap 试剂与传统抗 GFP 抗体进行沉淀，可节省超过 1 小时。

免疫荧光 (IF)

IF 实验通常需要很长时间，有时需要几天时间，具体取决于在优选的孵育长度上。首先固定样品，固定时间可以从不到 1 小时到过夜 12 小时不等。然后，进行抗原修复和封闭步骤，持续约 1-2 小时。接下来，将样品与一抗孵育过夜，短则 1.5 小时，长则 12 小时。最后，将样品与二抗一起孵育通常约 2 小时。这导致执行 IF 实验所需的时间从 4.5 小时到超过 27 小时不等。

在 IF 实验中节省至少 2 小时的一种方法是使用直接偶联的抗体。我们开发了 CoraLite® 染料偶联抗体，使您能够放弃二抗孵育并直接进行成像（图 2）。我们的 CoraLite® 染料-偶联抗体产品组合涵盖癌症、神经科学等领域的 400 多个热门靶点。

如果没有针对您的靶标的直接偶联抗体，可以使用 ChromoTek 的 Nano-Secondaries®。纳米二抗是二抗，由与荧光团缀合的纳米抗体 (VHH) 组成。由于纳米二抗是单价的并且对其目标物种 IgG 具有特异性，因此它们可以与您的一抗一起孵育，进行一步共孵育（图 2）。

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图 2. 免疫荧光工作流程的省时比较与传统方案相比，使用 CoraLite® 缀合一抗或 ChromoTek Nano-Secondaries® 至少可节省 2 小时。

此外，Nano-Secondaries 非常小（十分之一）传统抗体的大小）并且渗透速度更快；因此，孵化时间最多可缩短 50%。类似的时间节省可以也适用于 ChromoTek 的 Nano-Booster/Nano-Label 系列。这些是荧光标记的初级纳米抗体，可与标记的融合蛋白结合。

蛋白质印迹 (WB)

WB 实验是另一个耗时的过程。在大多数情况下，将样品加载到 SDS-PAGE 凝胶上并电泳 1.5 小时。然后将凝胶中的蛋白质转移到膜上，这可能需要 1 小时或更长时间。然后将膜封闭1小时。然后，与一抗孵育 2 至 12 小时过夜，然后与二抗孵育，再持续一小时。到成像为止，整个实验的持续时间为 6.5 至 16.5 小时。

我们提供多种直接偶联辣根过氧化物酶 (HRP) 的抗体，使您能够在一抗孵育后进行成像，并节省一个小时（图3）。靶标包括 GAPDH、GFP 和 β 肌动蛋白。如果荧光 WB 是您选择的方法，那么我们的 CoraLite® 染料偶联抗体产品组合是对你有好处。我们所有流行的对照抗体都是荧光偶联的。此外，您最喜爱的一抗可与 ChromoTek 的 Nano-Secondaries 一起用于荧光 WB，通过一抗和 Nano-Secondary 的一步孵育过程，节省您的时间。

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图 3. 使用 Proteintech 直接缀合一抗进行蛋白质印迹的时间节省比较抗体，节省1小时以上。

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